母鼠维生素D缺乏及干预对仔鼠肺发育及VEGF、SP-C表达影响的研究

摘要

目的：
　　通过建立Vit D缺乏及Vit D干预母鼠模型，观察母鼠孕期、哺乳期Vit D缺乏及适量1,25二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]干预对其仔鼠肺发育及肺血管内皮生长因子（VEGF）、肺组织表面活性蛋白C（SP-C）的变化，从而探讨母鼠Vit D缺乏及适量干预对仔鼠肺发育的影响及可能机制。
　　方法：
　　选取健康成年雌性清洁级SD大鼠，完全随机分为正常对照组（对照组）、Vit D缺乏组（缺乏组）、1,25-(OH)2D3干预组（干预组），每组6只。对照组及干预组母鼠予以正常饲料、正常光照喂养，缺乏组母鼠予不含Vit D饲料、避光喂养，试喂2周后，用ELISA法测定三组母鼠血清25-(OH)D值，再与正常成年雄性 SD大鼠合笼交配。于受孕第7天开始，干预组母鼠隔天一次给予1,25-(OH)2D3(10ug/kg)灌胃，对照组及缺乏组母鼠予1ml生理盐水代替灌胃，一直到分娩后第21天，再次测三组母鼠血清25-(OH)D值，并检测各组仔鼠生后第1天及第21天血清25-(OH)D值，再取生后第1、7、14、21天仔鼠肺组织，观察以下指标：1.仔鼠体重及肺湿重；2.光镜下观察肺形态结构；3.q-PCR法检测肺组织VEGF mRNA水平的表达；4.免疫组织化学方法分别检测肺组织VEGF、SP-C蛋白表达。
　　结果：
　　1.造模结果：通过不同方式喂养母鼠，试喂2周后三组母鼠之间血清25-(OH)D值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；分娩后第21天，缺乏组母鼠血清25-(OH)D值明显低于对照组及干预组母鼠，有显著差异（P＜0.01），干预组母鼠血清25-(OH)D值高于对照组母鼠，差异有统计学意义（P＜0.05）；新生第1天仔鼠三组之间血清25-(OH)D值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；新生第21天，缺乏组仔鼠血清25-(OH)D值低于对照组及干预组仔鼠，差异有统计学意义（P＜0.05），干预组仔鼠血清25-(OH)D值略高于对照组仔鼠，但差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　2.三组仔鼠体重及肺湿重结果：随着日龄的增加，缺乏组仔鼠体重、肺湿重均低于同日龄对照组仔鼠，增长速度缓慢，缺乏组第14、21天仔鼠体重较对照组仔鼠轻，差异有统计学意义（P＜0.05），第7、14、21天仔鼠肺湿重较对照组仔鼠轻，有显著差异（P＜0.01）；干预组仔鼠体重、肺湿重均高于同日龄对照组仔鼠，增长速度稍快，其体重较对照组仔鼠比均有差异（P＜0.05，0.01），第14、21天仔鼠的肺湿重较对照组仔鼠比有差异（P＜0.05）。
　　3.三组仔鼠HE染色光镜观察结果：缺乏组仔鼠较同日龄对照组仔鼠比肺组织肺泡数少，肺泡腔小，形态较不规则，实性团状结构区域增加，肺泡间隔较宽；干预组仔鼠较同日龄对照组仔鼠比肺组织肺泡数稍增加，肺泡腔大小均匀，实性团状结构区域减少，肺泡间隔较薄。
　　4.q-PCR法检测三组仔鼠肺组织VEGF mRNA表达结果：随着日龄的增加，对照组及干预组仔鼠肺组织VEGF mRNA的表达量逐渐增多，缺乏组仔鼠生后第1天表达量高于对照组及干预组仔鼠，差异有统计学意义（P＜0.05，0.01），生后第7天较前下降，表达量明显低于对照组及干预组仔鼠，有显著差异（P＜0.01），之后表达量逐渐增加，但增长幅度较对照组及干预组仔鼠缓慢，增长曲线与正常组及干预组仔鼠有交叉现象；干预组仔鼠增长幅度较对照组仔鼠稍快，表达量均高于对照组仔鼠，差异有统计学意义（P＜0.05，0.01）。
　　5.免疫组织化学方法检测三组仔鼠肺组织VEGF蛋白表达结果：随着日龄的增加，对照组及干预组仔鼠肺组织 VEGF蛋白的表达量逐渐增多，缺乏组仔鼠生后第1天表达量较对照组及干预组仔鼠略高，生后第7天较前下降，低于对照组及干预组仔鼠，差异有统计学意义（P＜0.05，0.01），之后表达量逐渐增加，增长幅度较对照组及干预组仔鼠缓慢；干预组仔鼠增长幅度较对照组仔鼠稍快，表达量均高于对照组仔鼠，第14、21天仔鼠之间差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　6.免疫组织化学方法检测三组仔鼠肺组织SP-C表达结果：三组仔鼠随着日龄的增加，肺组织SP-C的表达量逐渐增加，第21天最高；缺乏组仔鼠肺组织SP-C表达量均低于同日龄对照组及干预组仔鼠，差异有统计学意义（P＜0.05，0.01）；干预组仔鼠肺组织SP-C表达量较同日龄对照组仔鼠高，第14、21天仔鼠之间差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　1.母鼠孕期、哺乳期Vit D缺乏会抑制其仔鼠生后的肺发育过程，若给予适量1,25-(OH)2D3干预，对仔鼠的肺发育过程有一定帮助。
　　2.母鼠孕期、哺乳期Vit D缺乏及适量补充1,25-(OH)2D3可能通过影响仔鼠肺组织VEGF、SP-C的表达，从而干扰其肺发育。

目录

声明

中英文缩略词表

第1章 引 言

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计学处理

第3章 实验结果

3.1 三组母鼠及仔鼠不同时期血清25-(OH)D水平

3.2 三组仔鼠各年龄段体重、肺湿重及肺湿重/体重比

3.3 三组仔鼠各年龄段肺组织病理形态学观察

3.4 三组仔鼠各年龄段肺组织VEGF mRNA表达

3.5 三组仔鼠各年龄段肺组织VEGF蛋白的表达

3.6 三组仔鼠各年龄段肺组织SP-C蛋白的表达

第4章 讨 论

4.1 造模结果分析

4.2 母鼠Vit D缺乏及干预对仔鼠肺发育及体重、肺湿重的影响

4.3 母鼠 Vit D 缺乏及干预对仔鼠肺组织 VEGF mRNA 及蛋白表达的影响

4.4 母鼠Vit D缺乏及干预对仔鼠肺组织SP-C蛋白表达的影响

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2展望

致谢

参考文献

附图

攻读学位期间的研究成果

综述:SP-C在呼吸系统疾病中的研究进展