MiR-93-5p在胃癌中的临床意义及促胃癌增殖的分子机制

摘要

目的： 探讨miR-93-5p在胃癌中的临床意义，生物学功能以及miR-93-5p与Hippo通路之间的调控关系，同时寻找新型的胃癌治疗靶点，为胃癌诊治提供新思路。方法: 1、运用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测30例胃癌患者新鲜胃癌组织及30例癌旁组织中miR-93-5p的表达；同时分析miR-93-5p表达水平与胃癌组织病理特征之间的关系。 2、运用siRNA干扰技术，分别干扰miR-93-5p在SGC-7901及HGC-27胃癌细胞系中的表达，实验分组：对照组为Negative control组，实验组为miR-93-5p mimics组及miR-93-5p inhibitor组，同时运用qRT-PCR检测干扰后胃癌细胞系中miR-93-5p的表达情况。 3、运用Western blot实验检测干扰miR-93-5p表达后Hippo通路中关键分子的表达情况，YAP蛋白在胃癌细胞中的分布及EMT蛋白的表达情况。 4、运用CCK-8实验及平板克隆实验检测干扰miR-93-5p表达后胃癌细胞增殖能力的变化。 5、运用Transwell实验检测干扰miR-93-5p表达后胃癌细胞迁移、侵袭能力的变化。 6、运用荧光素酶报告实验检测miR-93-5p的靶基因。结果： 1、MiR-93-5p与胃癌的分化及其淋巴结转移相关。 2、MiR-93-5p在胃癌中过表达，并且促进胃癌细胞的增殖。 3、MiR-93-5p促进胃癌细胞的迁移，侵袭及EMT过程。 4、MiR-93-5p调节Hippo通路中多个关键因子。 5、FAT4及LATS2是miR-93-5p的靶基因。 结论： MiR-93-5p在胃癌中过表达，并通过靶向FAT4及LATS2调节Hippo通路，与胃癌的发生与发展密切相关，可能为胃癌早期诊断标记物或者治疗靶标。

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中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1实验材料

2.1.1组织标本

2.1.2 细胞株

2.1.3 主要设备及材料

2.1.4 主要试剂RPMI-1640培养基胎牛血清

2.2实验方法

2.2.1细胞培养

2.2.2细胞转染

2.2.3实时荧光定量PCR

2.2.4 Western Blot

2.2.5 CCK-8法检测细胞生长曲线

2.2.6 平板细胞克隆实验

2.2.7 细胞迁移、侵袭实验

2.2.8 荧光素酶报告实验

2.2.9 统计分析

第3章 结果

3.1 MiR-93-5p在胃癌中的表达和临床意义

3.2 MiR-93-5p对胃癌细胞增殖能力的影响

3.3 MiR-93-5p对胃癌细胞迁移、侵袭及EMT的影响

3.3.1 Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力

3.3.2 Western Blotting检测胃癌细胞EMT蛋白

3.4 MiR-93-5p对Hippo通路的影响

3.5 FAT4和LATS2在是miR-93-5p的靶基因

第4章 讨论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:MiRNA在胃癌中的作用及意义