第一个书签之前
第1章 引言
1.1 神经干细胞
1.1.1 神经干细胞概述
1.1.2 神经干细胞龛和神经发生
1.2 单细胞转录组测序技术
1.2.1 单细胞的捕获
1.2.2 单细胞全转录组扩增
1.2.2.1 基于体外转录的单细胞WTA
1.2.2.2 基于添加同聚体尾的单细胞WTA
1.2.2.3 基于模板转换的单细胞WTA
1.3 单细胞转录组测序在神经系统研究中的应用
1.3.1 探究神经细胞的分子分类
1.3.2 揭示神经性疾病的相关机制
1.4 课题研究目的和意义
第2章 实验材料
2.1 实验设备
2.2 试剂耗材
2.3 实验引物信息
2.4 实验动物
第3章 实验方法
3.1 实验小鼠基因型鉴定
3.1.1主要试剂
3.1.2 操作步骤
3.2 小鼠Tamoxifen注射
3.2.1 主要试剂
3.2.2 配制Tamoxifen溶液(10mg/ml)
3.2.3 转基因小鼠注射Tamoxifen溶液
3.3 原代小鼠神经细胞单细胞消化
3.3.1 主要试剂
3.3.2 操作步骤
3.4 SMART-seq2单细胞全长转录本扩增
3.4.1 主要试剂
3.4.2 操作步骤
3.5 实时荧光定量PCR初步检测文库质量
3.5.1 主要试剂
3.5.2 操作步骤
3.6 Angilent 2100 Bioanalyser检测cDNA文库质量
3.6.1 主要试剂
3.6.2 操作步骤
3.7 Qbit 3.0 cDNA文库定量
3.7.1 主要试剂
3.7.2 操作步骤
3.8 cDNA Illumina测序文库构建
3.8.1 1 ng起始DNA片段化
3.8.2 磁珠分选特定长度产物
3.9 琼脂糖凝胶电泳检测文库分布
3.9.1主要试剂
3.9.2 操作步骤
3.10 .生物信息学分析
3.10.1 基因丰度估计和筛选
3.10.2 样本类型划分
3.10.3 主成分分析
3.10.4 加权基因共表达网络分析
第4章 实验结果
4.1 小鼠基因型鉴定结果
4.1.1 Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen小鼠的基因型鉴定
4.1.2 CD133-Cre-ERT2小鼠基因型鉴定
4.2 ZsGreen+细胞的流式分选
4.3 样本与磁珠体积比例的确定
4.4 dNTP用量和M-MLV反转录酶的确定
4.5 qPCR初步检测单细胞cDNA文库的质量
4.6 cDNA的质量控制结果
4.7 cDNA文库的定量
4.8 Illumina二代测序文库的构建和质控
4.9 测序数据的生物信息分析
4.9.1 无监督聚类分析
4.9.2主成分分析（Principal component analysis，PCA）
4.9.3 加权基因共表达网络分析（Weighted Gene Co-expression Network Analyses，WGCNA）
4.9.4 GO基因功能富集分析和KEGG通路分析
第5章 结论与讨论
5.1 结论
5.2 讨论
致 谢
