茶多酚对三邻甲苯基磷酸酯诱导小鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用及机制研究

摘要

目的： 三邻甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate, TOCP）在工业及日常生活上应用广泛，TOCP对女性生殖系统有一定的损伤，但其作用机制尚不清楚。本文拟研究 TOCP对小鼠卵巢和卵巢颗粒细胞的损伤及其可能机制，并初步探讨茶多酚（Tea polyphenols, TP）对TOCP诱导的小鼠卵巢和卵巢颗粒细胞损伤是否具有保护作用及其可能机制。 方法： 用Western blot检测TOCP及TP干预后TOCP对小鼠卵巢组织及卵巢颗粒细胞自噬的影响；用活性氧检测试剂盒检测TOCP及TP干预后TOCP对小鼠卵巢组织及卵巢颗粒细胞氧化应激的影响；用 MTT法检测 TOCP及 TP干预后TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞活性的影响；用透射电子显微镜（ Transmission electron microscopy,TEM）检测TOCP及TP干预后TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响。 结果： 用不同剂量的TOCP（0,100,200,400 mg/kg）给小鼠连续灌胃14天，结果显示，TOCP可显著增加小鼠卵巢组织中自噬蛋白 LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表达量，表明TOCP可诱导小鼠卵巢组织自噬。同时，TOCP还可增加小鼠卵巢组织中MDA含量，降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性，表明TOCP可诱导小鼠卵巢组织产生氧化应激。而TP预处理可抑制TOCP对小鼠卵巢组织氧化应激和自噬的诱导。提示TP可通过抑制小鼠卵巢组织产生氧化应激，从而抑制小鼠卵巢组织自噬。 用不同浓度TOCP（0,0.125,0.25,0.5 mM）处理原代培养的小鼠卵巢颗粒细胞48小时，MTT结果显示，TOCP呈浓度依赖式地抑制小鼠卵巢颗粒细胞活性（P<0.05）；同时 TOCP可显著增加体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞中自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表达量，表明TOCP可诱导小鼠卵巢颗粒细胞自噬。TOCP可显著增加小鼠卵巢颗粒细胞中MDA含量，降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性，表明TOCP可诱导小鼠卵巢颗粒细胞产生氧化应激。而TP预处理可挽救TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞活性的抑制（P<0.05）；同时，TP预处理还可显著抑制TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激。Western blot结果显示，TP预处理可降低TOCP处理组中的LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表达量；TEM结果显示，TOCP处理组的细胞中均出现大量的自噬泡，而TP预处理后可显著减少TOCP处理组中细胞的自噬泡数量。提示TP可通过抑制细胞产生氧化应激，从而抑制TOCP诱导的小鼠卵巢颗粒细胞自噬。 结论： TOCP可通过诱导小鼠卵巢组织及其颗粒细胞产生氧化应激而导致自噬并造成损伤；TP可通过抑制TOCP诱导的卵巢组织及其颗粒细胞产生氧化应激而抑制细胞自噬的发生，并对TOCP引起卵巢及其颗粒细胞的损伤起保护作用。

目录

声明

中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1动物

2.1.2主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.1.4 主要试剂及药物的配制

2.2 方法

2.2.1 动物准备及分组

2.2.2 分离提取小鼠卵巢颗粒细胞

2.2.3 MTT法检测小鼠卵巢颗粒细胞的细胞活性

2.2.4 Western Blot检测小鼠卵巢组织和卵巢颗粒细胞自噬

2.2.5 小鼠卵巢组织和卵巢颗粒细胞氧化应激的检测

2.2.6 TEM检测小鼠卵巢细胞自噬

2.2.7 统计处理

第3章 结果

3.1 TOCP对小鼠卵巢组织自噬的影响

3.2 TOCP对小鼠卵巢组织氧化应激的影响

3.3 TP抑制TOCP诱导的小鼠卵巢组织氧化应激

3.4 TP抑制TOCP诱导的小鼠卵巢组织自噬

3.5 TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响

3.6 TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激的影响

3.7 TP抑制TOCP诱导小鼠卵巢颗粒细胞产生氧化应激

3.8 TP抑制TOCP诱导的小鼠卵巢颗粒细胞自噬

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:不同类型内分泌干扰物对生殖系统的损害及其可能机制的探讨