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抗H7N9亚型流感病毒神经氨酸酶嵌合抗体的制备及初步鉴定

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英文缩略词对照表

第1章 引言

1.1 概述

1.2 H7N9禽流感病毒的流行情况

1.3 H7N9病毒的HA和NA与其致病性的关系

1.4 国内外针对H7N9防治策略的研究进展

1.5 神经氨酸酶(NA)抗体的研究目的及意义

第2章 材料与方法

2.1 研究对象

2.2 实验材料

2.3 嵌合抗体的基因扩增及筛选

2.3.1 杂交瘤细胞RNA提取

2.3.2 嵌合抗体基因扩增

2.3.3 嵌合抗体可变区基因测序

2.3.4 嵌合抗体体外表达

2.3.5 嵌合抗体筛选

2.4 嵌合抗体表达制备

2.4.1 抗体基因表达质粒制备

2.4.2 嵌合抗体表达

2.4.3 嵌合抗体纯化

2.5病毒扩增及测定病毒TCID50滴度

2.5.1 鸡胚扩增病毒

2.5.2 测定病毒TCID50滴度

2.6 嵌合抗体功能鉴定

2.6.1 间接ELISA检测嵌合抗体结合活性

2.6.2 流式细胞技术鉴定嵌合抗体结合谱

2.6.3 生物膜干涉技术测定嵌合抗体亲和力

2.6.4红细胞凝集抑制(Hemagglutination inhibition,HI)

2.6.5神经氨酸酶抑制实验(Neuraminidase inhibition,NI)

2.6.6 微量中和实验

2.6.7 空斑实验

2.6.8体外自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)实验

2.6.9 竞争ELISA鉴定抗体结合部位

第3章 结果

3.1 人源化抗体的遗传信息

3.2 细胞转染上清对AH-N9蛋白的结合能力

3.3 间接ELISA鉴定3株嵌合抗体对不同重组蛋白的识别情况

3.4 流式细胞术鉴定嵌合抗体对不同病毒及质粒的结合活性

3.5 生物膜干涉技术检测嵌合抗体1E2和3E3的亲和力

3.6 嵌合抗体HI及NI实验检测结果

3.7 微量中和实验结果

3.8 空斑实验结果

3.9 体外ADCC实验结果

3.10 抗体结合表位检测结果

第4章 讨论

4.1 三株嵌合抗体结果分析

4.2 本研究的意义及存在的局限性

第5章 结论和展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

附录

攻读学位期间的研究成果

综述:靶向神经氨酸酶的广谱中和抗体研究进展

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