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高毒力肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药、分子流行病学及其形成发展的分子机制

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引言

第一章 碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药分子特征及高毒力株临床流行

1.实验材料

1.1 菌株来源及鉴定

1.3实验所需试剂及设备

1.4主要溶液的配制

2.研究方法

2.1药敏试验

2.2临床基本资料收集

2.3高黏液表型检测—拉丝试验

2.4肺炎克雷伯菌DNA模板提取

2.5 PCR检测

2.6 PFGE

2.7 S1-PFGE

2.8 Southern blot

2.9 统计学分析

3.结果

3.1 药敏试验

3.2 碳青霉烯酶检测结果及分布

3.3 产NDM酶CR-KP感染临床信息及耐药机制

3.2 拉丝试验

3.4 CR-hvKP菌荚膜血清型分布

3.5 CR-hvKP菌感染临床信息及预后

4.讨论

第二章 高毒力克雷伯菌碳青霉烯类等相关耐药机制及毒力特征研究

1.实验材料

1.1菌株来源及鉴定

1.2实验中使用的质控及参考菌株

1.3实验所需试剂

1.4主要仪器和设备

2.研究方法

2.1菌株DNA模板提取

2.2 PCR检测

2.3 MLST

2.4 PFGE

2.5患者临床信息资料收集

2.6 Southern blot实验

2.7 质粒接合试验

2.8血清抗性试验

2.9 抗中性粒细胞吞噬试验

2.10 生物膜形成实验

2.11 小鼠半数致死量试验

2.12 统计学分析

3.结果

3.1 CR-hvKP菌株碳青霉烯酶分布及流行特征

3.2 OmpK36在hvKP菌中的分型及与毒力关系

3.3 PMQR基因在hvKP菌中的作用及分子流行病学

4 讨论

第三章 碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌基因组学及分子进化机制

1 实验材料

1.1菌株来源及鉴定

1.2实验中使用的质控及参考菌株

1.3实验所需试剂

1.4主要仪器和设备

2 研究方法

2.1 CR-hvKP菌全基因组提取

2.2 CR-hvKP菌二代全基因组测序

2.3生物信息学分析

2.4 血清抗性试验

2.5 抗中性粒细胞吞噬试验

2.6生物膜形成试验

2.7小鼠半数致死量试验

2.8 统计学分析

3.结果

3.1 cKP携带pLVPK-like毒力质粒而形成CR-hvKP菌

3.2 hvKP菌株携带碳青霉烯酶质粒而形成CR-hvKP菌

3.3 首次发现同时携带碳青霉烯酶质粒和毒力质粒的CR-hvKP菌

3.4 CR-hvKP菌株与cKP菌、hvKP菌的亲缘性分析

4.讨论

第四章 高毒力肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药发展分子机制及对毒力影响

1 实验材料

1.1菌株来源及鉴定

1.2实验中使用的质控及参考菌株

1.3实验所需试剂

1.4主要仪器和设备

2 研究方法

2.1 质粒转化试验

2.2基因组学分析

2.3总RNA提取

2.4 转录组测序(RNA-seq)

2.5 qRT-PCR扩增

2.6 统计学分析

3 结果

3.1碳青霉烯酶质粒转化对hvKP菌毒力的影响

3.2 碳青霉烯酶质粒转化后对hvKP菌基因组学及转录组学的影响

3.3 RT-PCR验证差异表达基因及分析

4 讨论

第5 结论与展望

5.1 结论

5.2 进一步工作的方向

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:高毒力/高黏液性肺炎克雷伯菌耐药机制及毒力研究进展

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