酶法改变人参皂甙Rg糖基以获得高抗肿瘤活活物质-人参皂甙Rh的研究

摘要

该文以得到具有抗癌功能的活性物质-人参皂甙Rh<,2>为目的,进行了酶法改变人参 皂甙Rg<,3>糖基以获得高抗癌活性物质-人参皂甙Rh<,2>的可行性.并对高产人参皂甙β-葡萄糖苷酶的菌种进行了筛选,同时对该酶的性质进行了研究.该文选取8种霉菌,筛选了能 水解人参皂甙β-葡萄糖苷键的β-葡萄糖苷酶的高产菌株,研究了酶法改变人参皂甙糖基 、以去掉人参皂甙Rg<,3>上的一个葡萄糖基成为高抗癌的人参皂甙Rh<,2>的可能性.对sp.48g、sp.848g所产酶经分离提纯后的相应酶蛋白,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电 泳和聚丙烯酰凝胶电泳,都得到了电泳单点,同时也选择了有纤维素外切酶活力的sp.39g,测其酶蛋白的分子量作为对照,其酶蛋白分子量分别为34,000、37,000和51,000.由于人参皂甙Rg<,3>不易溶于水,而易溶于乙醇,所以对不同浓度乙醇溶解人参皂甙Rg<,3>的酶解反应进行了研究,结果表明,30﹪乙醇浓度溶解人参皂甙Rg<,3>的酶解反应效果最好.

目录

文摘

英文文摘

第一部分文献综述

1.1人参的植物形态及生态学特征

1.2人参的化学成分

1.3人参皂甙的应用、开发及研究进展

1.3.1人参皂甙的结构特点和理化性质

1.3.2人参的药理作用

1.3.3人参皂甙的分离提取与分析方法

1.4人参皂甙结构改造的研究进展及本章的主要研究内容

1.4.1人参皂甙的化学水解和转化研究进展

1.4.2酶法改变人参皂甙结构

1.4.3本章的主要研究内容

第二部分材料与方法

2.1实验材料

2.1.1菌种：

2.1.2试剂与仪器

2.2实验方法

2.2.1菌种的培养

2.2.2产酶培养基及酶液的制备

2.2.3酶液的冻干

2.2.4酶的分离提纯

2.2.5酶液中蛋白质含量的分析

2.2.6酶活的测定：

2.2.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定酶蛋白分子量：

2.2.8不同乙醇浓度溶解底物的酶解反应

第三部分结果与讨论

3.1高产人参皂甙β-葡萄糖苷酶的菌种的选择

3.1.1各菌株产水解人参皂甙Rg3成为Rh2的β-葡萄糖苷酶能力及其目标菌的确定

3.1.2目标菌最佳反应条件的确定

3.1.3小结

3.2人参皂甙β-葡萄糖苷酶的分离提纯及酶学性质

3.2.1不同浓度乙醇对目的菌所产酶沉淀的影响

3.2.2高效液相蛋白制备色谱分离提纯酶

3.2.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定提纯酶的纯度及其分子量的测定

3.3不同乙醇浓度溶解底物的酶解反应

结论

附图

参考文献

致谢