转基因技术改良水稻品种对病虫及除草剂抗性的研究

摘要

本研究选用了4个粳稻品种(系)广陵香粳、武香粳9号、4901和武香99-15以及2个籼稻品种珍汕97和协青早为材料，通过根癌农杆菌介导将与抗病虫和抗除草剂相关的基因——源于苏云金芽孢杆菌的Bt基因、雪花莲凝集素GNA基因、克隆自甜椒的编码类铁氧还原双亲性蛋白的Apl(Amphipathic protein1)基因及克隆来自土壤吸水链霉菌Bar(bialaphos)基因分别导入受体品种中，以研究提高水稻对病虫或除草剂抗性的效果。同时，本研究还比较了超双元载体与双菌双载体法获得无抗性选择标记、只含有目的基因的个体的可能性及其达到的研究效率。

目录

前言

1材料与方法

1.1实验材料

1.2培养基

1.3质粒DNA的提取、纯化及转化

1.4水稻愈伤组织的诱导及培养

1.5根癌农杆菌的培养及其介导的转化

1.6转基因水稻植株总DNA的PCR分析

1.7转基因水稻植株总DNA的Southern杂交分析

1.8转Bt基因水稻植株中BT毒蛋白的ELISA分析

1.9除草剂抗性分析

1.10.转Bt基因水稻对稻二化螟抗性鉴定

1.11转GNA基因水稻对褐飞虱抗性鉴定

1.12转Apl基因水稻抗病性鉴定

1.13转基因水稻植株农艺性状的调查

1.14将多个抗病虫基因聚合于同一个水稻品种中

二、结果和分析

2.1无选择标记转Bt基因抗螟虫水稻的选育

2.1.1无选择标记转Bt基因水稻植株的培育

2.1.2转Bt基因水稻植株中BT毒蛋白的ELISA分析

2.1.3转Bt基因水稻抗二化螟鉴定

2.1.4转Bt基因水稻植株农艺性状的调查

2.2无选择标记转Apl基因抗病水稻的选育

2.2.1无选择标记转Apl基因水稻植株的培育

2.2.2转Apl基因水稻抗病鉴定

2.2.3转Apl基因水稻植株农艺性状的调查

2.3转GNA和Bar基因抗除草剂和抗褐飞虱水稻的选育

2.3.1含GNA和Bar基因的双价转基因水稻的培育

2.3.2除草剂抗性分析

2.3.3褐飞虱抗性分析

2.3.4转GNA和Bar基因水稻农艺性状的调查

2.4将多个抗病虫基因聚合于同一个水稻品种中

2.4.1Bt基因与Apl基因共转化植株的培育

2.4.2通过有性杂交聚合外源基因

3讨论

3.1将多个外源基因导入水稻中,改良水稻的抗病和抗虫特性

3.2无抗性选择标记转基因水稻的获得

3.3 Apl在持久抗病转基因育种中的应用价值

3.4Bt毒蛋白基因与雪花莲凝集素GNA基因聚合的效果

3.5转基因植株农艺性状的表现

参考文献

附录

致谢