对乙酰氨基苯磺酰氟作为氨基酸衍生试剂性能的研究及其在毛细管电泳分离检测氨基酸中的应用

摘要

一、对乙酰氨基苯磺酰氟的合成及其氨基酸衍生性能的研究采用一种新的方法合成了一种新的紫外衍生试剂——对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)用来标记和测定氨基酸。PAABS-F的摩尔吸光系数为3.00×10<'4>L·mol<'-1>·cm<'-1>，是常用紫外衍生试剂的三倍。PAABS-F非常稳定，便宜，无毒，容易在实验室合成并能与一级和二级氨基酸快速反应。反应条件温和，与氨基酸反应后的衍生产物很稳定，检测灵敏度高，且衍生反应产率也很高。在室温无须避光的条件下存放7天也无其他副产物产生。被PAABS-F标记的20种常见氨基酸能在毛细管电泳上成功分离检测。质量检出下限(S/N=3)为59.3 fmol(色氨酸)-1.70 pmol(组氨酸)。 二、PAABS-F衍生测定酒中的氨基酸建立了一种简单快速的方法分离检测用对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)衍生的20种标准氨基酸。在35℃下，20种标准氨基酸与PAABS-F反应30 min后在毛细管电泳上分离检测。缓冲液为pH 9.3的20 mmol/L的硼酸缓冲液，126 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)，8 mmol/L β-环糊精(β-CD)和20 mmol/L NaCl。分离结果表明，在利用毛细管电泳分离阴离子物质时，β-CD是一种有效的添加剂。在最佳分离条件下，20种标准氨基酸在16 min内被成功分离检测。利用这种方法，分离测定了啤酒和黄酒中的氨基酸。 三、通过控制电渗流采用胶束电动色谱改进氨基酸的分离研究了Mg<'2+>和三种一价阳离子(Na<'+>，Li<'+>和K<'+>)作为缓冲液添加剂以减少电渗流，从而改进胶束电动色谱分离对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)衍生的20种标准氨基酸。研究发现，随着阳离子浓度的增加，电渗流(EOF)不断减小的顺序为Mg<'2+>>K<'+>>Na<'+>>Li<'+>。综合考虑迁移时间、分离度和峰型等因数，Na<'+>作为缓冲液添加剂是最佳的。采用这种方法，20种标准氨基酸在不到14 min内得到了成功的分离。四、氨基酸的毛细管电泳手性拆分研究以对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)为柱前紫外衍生试剂，利用胶束电动色谱(MEKC)，以环糊精(α-环糊精(α-CD)、β-环糊精(β-CD))和脱氧胆酸钠(SDC)作为手性选择剂，通过优化分离过程中的相关参数，实现了10种氨基酸成功的手性分离。

目录

摘要

第一章前言

1.1氨基酸

1.1.1概述

1.1.2氨基酸常用的分离分析方法

1.1.3手性氨基酸常用的分离分析方法

1.2氨基酸常用的衍生试剂

1.2.1概述

1.2.2常用的衍生试剂及各自的优缺点

1.3本论文的主要研究内容及创新点

1.4课题来源

1.5参考文献

第二章对乙酰氨基苯磺酰氟的合成及其氨基酸衍生性能的研究

2.1实验部分

2.1.1仪器与试剂

2.1.2 PAABS-F的合成

2.1.3 PAABS-F的红外光谱、元素分析、核磁和质谱

2.1.4 PAABS-F紫外最大吸收波长和摩尔吸光系数的测定

2.1.5氨基酸的衍生步骤

2.2结果与讨论

2.2.1 PAABS-F的紫外最大吸收波长和摩尔吸光系数

2.2.2氨基酸衍生物的紫外最大吸收波长

2.2.3 PAABS-F及其氨基酸衍生物的稳定性

2.2.4反应温度对反应的影响

2.2.5不同有机添加剂对反应的影响

2.2.6 pH值对反应的影响

2.2.7氨基酸与衍生试剂比例对反应的影响

2.2.8氨基酸的PAABS-F衍生物在毛细管电泳上的分离

2.3结论

2.4参考文献

第三章PAABS-F衍生测定酒中的氨基酸

3.1实验部分

3.1.1仪器与试剂

3.1.2氨基酸的衍生和分离

3.2结果与讨论

3.2.1缓冲溶液的浓度对分离的影响

3.2.2表面活性剂的浓度对分离的影响

3.2.3缓冲溶液pH值对分离的影响

3.2.4离子添加剂对分离的影响

3.2.5 β-CD的浓度对分离的影响

3.2.6衍生物的分离

3.2.7测定酒样品中的氨基酸

3.3结论

3.4参考文献

第四章通过控制电渗流采用胶束电动色谱改进氨基酸的分离

4.1实验部分

4.1.1仪器与试剂

4.1.2氨基酸的衍生和分离

4.2结果与讨论

4.2.1胶束电动色谱分离条件

4.2.2缓冲液中阳离子对分离的影响

4.2.3氨基酸的PAABS-F衍生物的分离

4.2.4胶束电动色谱分离PAABS-氨基酸的衍生物

4.3结论

4.4参考文献

第五章氨基酸的毛细管电泳手性拆分研究

5.1实验部分

5.1.1仪器与试剂

5.1.2实验方法

5.2结果与讨论

5.2.1缓冲液浓度对分离的影响

5.2.2缓冲液pH值对分离的影响

5.2.3 CD种类对分离的影响

5.2.4 CD和SDC摩尔比对分离的影响

5.2.5有机添加剂、温度及电压对分离的影响

5.2.6氨基酸衍生物的手性拆分

5.3结论

5.4参考文献

硕士研究生期间发表的论文

致谢