CpG质粒DNA纳米颗粒的制备及鸡免疫刺激活性研究

摘要

CpG寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotice，CpG ODN)是近年来发现的新型免疫佐剂，对免疫细胞具有广泛的激活作用。本研究首先以阳离子多聚体聚乙烯亚胺(PEI)、壳聚糖为包被材料，研制含质粒DNA纳米颗粒，利用凝胶阻滞试验、电镜观察和体外质粒释放试验等试验证明，制备的纳米颗粒包裹效率、均一度、稳定性较高。进而以含不同拷贝数CpG基序的三种重组质粒进行鸡淋巴细胞转化试验，根据MTT比色法测定结果，筛选得免疫刺激效果最佳的质粒。然后分别以PEI和壳聚糖为包裹材料，制备质粒DNA纳米颗粒，进行淋巴细胞体外转化试验，结果表明，以生理盐水为溶媒和N/P比为6制备的PEI/CpG重组质粒纳米颗粒具有最佳的免疫刺激活性。最后用重组菌发酵培养大规模制备重组质粒pcDNA-CpG60，用纯化质粒分别制备PEI和壳聚糖纳米颗粒，以100μg/只和200μg/只质粒剂量与新城疫弱毒活疫苗联合免疫试验鸡，分别于接种后7、14、21、28、35天采集血清，测定血凝抑制抗体效价，结果表明pcDNA-CpG60裸质粒及纳米颗粒能够增强疫苗的免疫效果，其中以生理盐水为溶媒、N/P比为6制备的PEI纳米颗粒的免疫刺激活性最强，产生的抗体滴度高且均一。

目录

摘要

综述

研究内容一：CpG质粒DNA纳米颗粒的制备与鉴定

研究内容二：鸡免疫刺激性CpG重组质粒及纳米颗粒的筛选

研究内容三：CpG重组质粒纳米颗粒对新城疫弱毒苗免疫效果的影响

结论

致谢