Beagle母犬生殖器官发育及其ERmRNA、PRmRNA表达规律的研究

摘要

犬属单次发情动物，间情期较长，犬科动物这一特殊的繁殖生理特点严重制约着以犬为研究载体的科学研究的发展。犬的生殖特性的研究有助于从理论上对其生殖生理的进一步认识，也为提高其繁殖力奠定理论基础。本文在研究Beagle母犬一般生殖生理特点的基础上，以组织学方法和原位分子杂交方法对Beagle母犬生殖器官的发育及其激素受体的表达规律进行了研究，主要结果如下。 1、Beagle母犬的一般繁殖性能发情周期为230-250天；全年均可发情，但存在一定的季节差异；发情前期开始的第9-11天交配受孕率高，产仔数多；Beagle犬的妊娠期平均为62.19天；每胎产仔数平均为5.30头；仔犬雌雄比例为0.98：1；离乳仔犬成活率为81.10％。 2、初生至18月龄Beagle母犬生殖器官的组织学变化①初生时Beagle母犬卵巢的皮质部含有大量的原始卵泡，颗粒细胞呈扁平排列在卵母细胞的周围，随着月龄的增长，颗粒细胞层变多，卵泡体积变大。3月龄出现初级卵泡，6月龄出现次级卵泡，9月龄出现成熟卵泡和黄体。在不同月龄的卵巢均可见有多卵卵泡的存在，且多卵卵泡数量呈下降趋势。②初生时Beagle母犬子宫腺体的体积小、数量少、基质也少，随着月龄的增长子宫腺体不断发育增生，子宫腺体体积变大，数量逐渐增多，腺体周围的基质也逐渐密集。⑧初生至9月龄Beagle母犬输卵管黏膜层形成初级皱襞，12月龄后的输卵管开始出现较多次级皱襞，黏膜几乎充满整个管腔，黏膜衬以柱状纤毛细胞和无纤毛的楔形细胞。 3、血清中类固醇激素的变化初生时，Beagle母犬血清中E<,2>浓度最低，出生后不久E<,2>水平迅速上升，在12月龄时浓度最高，在12月龄后呈下降趋势；初生时，犬血清中P<,4>的浓度为0，在12月龄时P<,4>浓度达到最高值。3月龄起，直至实验结束的18月龄，其E<,2>维持于20 pg/ml左右，而P<,4>一直维持于较低的水平(<0.8 ng/ml)。在发情周期，E<,2>在总体上维持在较高水平；而P在第9天前呈上升趋势，在第9天达到峰值，后浓度下降。 4、脑垂体和生殖器官中雌激素受体mRNA相对表达丰度的变化ERamRNA阳性斑点主要出现在Beagle母犬卵巢中各级卵泡的颗粒细胞，有腔卵泡与排卵前卵泡的颗粒卵泡和内膜细胞，且大卵泡的阳性率明显高于小卵泡。初生母犬卵巢ERamRNA表达不明显，3～9月龄之间的阳性率呈增长趋势，9月龄后阳性率略有下降却维持在较高的水平；卵巢中ERamRNA在发情前期和发情期表达水平较高。ERamRNA阳性斑点主要出现于Beagle母犬子宫腺体细胞，少见于基质中和平滑肌细胞中。初生母犬子宫内ERamRNA表达不明显，从初生至15月龄过程中ERamRNA的阳性率随子宫内膜腺体细胞的数量和体积同步增加，阳性率和日龄两者之间呈正相关(p<0.01)；在发情周期，ERamRNA表达呈下降趋势。ERamRNA的阳性斑点主要出现于Beagle母犬脑垂体的腺体细胞。初生时ERamRNA几乎不表达，随着月龄的增加，ERamRNA一直维持在较高的水平；在发情周期，随着见阴道滴血后天数的增加，ERamRNA表达呈下降趋势。 5、脑垂体和生殖器官中孕激素受体mRNA相对表达丰度的变化PRmRNA主要原位杂交阳性信号集中于表面上皮细胞，各级卵泡的颗粒细胞，有腔卵泡与排卵前卵泡的颗粒卵泡、内膜细胞、外膜细胞、黄体细胞和间质细胞中。初生卵巢PRmRNA不表达，3～18月龄之间的阳性率呈增长趋势；PRmRNA表达水平在发情前期前较高，后下降，在第九天又达到较高水平。PRmRNA的阳性斑点主要出现于Beagle母犬子宫腺体细胞，少见于基质中和平滑肌细胞中。初生至12月龄过程中PRmRNA几乎不表达；在发情周期，而PRmRNA表达呈上升趋势。PRmRNA的阳性斑点主要出现于Beagle母犬脑垂体的腺体细胞。初生时PRmRNA几乎不表达，随着月龄的增加，PRmRNA在3月龄和6月龄表达水平较高，后表达水平下降。在发情周期PRmRNA一直维持在较低的水平。 本试验首次采用原位杂交(ISH)的方法检测了Beagle母犬生殖器官中ERa和PRmRNA的相对表达丰度，建立了检测ERα和PRmRNA水平的一种方法；同时阐述了Beagle母犬外周血性激素水平、生殖器官的局部形态发育及ERamRNA和PRmRNA相对表达丰度三者之间的相关性，为进一步探索ER和PR基因转录翻译水平差异与繁殖性能的关系奠定基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

第一部分文献综述

第二部分研究论文

第一章Beagle犬繁育性能的研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第二章Beagle犬生殖器官发育的组织学研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三章Beagle母犬生殖器官中ERαmRNA、PRmRNA表达变化规律的研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

参考文献

致谢

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