检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的HI试验与ELISA相关性比较

摘要

本试验用传染性支气管炎病毒(IBV)M4l毒株接种10～11日龄的SPF鸡胚，在37℃培养36小时后冷冻，收获的尿囊液先经1，000xg离心30min，弃去沉淀，将含有IBV的上清39，000xg超速离心50min或者PEG8000浓缩后，加HEPES缓冲液使IBV尿囊液的最终体积为原体积的1/100，然后加入胰酶、I型卵磷脂酶C(PLC1)、神经氨酸酶处理IBV，胰酶、I型卵磷脂酶C(PLC1)、神经氨酸酶的终浓度分别为lunit/ml、2.5units/ml、2.5units/ml，IBV悬液和酶充分混合后，置37℃水浴3个小时，期间不断振荡。制备好的IBV HI抗原用于IBV HA试验，置4℃保存。 制备的IBV HI抗原在HA试验中能够凝集鸡红细胞，由胰酶处理IBV制备的抗原在IBV HI试验中不具有特异性，而由PLCl、神经氨酸酶制各的抗原在IBV HI试验中表现出很强的特异性。制备的抗原与进口抗原相比较，IBV HA试验达到很高的效价。 本试验对影响IBV HI试验的各种因素做了比较研究，选择l％的鸡红细胞，pH6.5 0.0lM HEPES缓冲液为稀释液，抗原抗体在室温作用30min，加红细胞后4℃50min判定结果等条件，建立了监测IBV HI抗体的HI试验。该试验具有很强的特异性和重复性。 用建立的IBV HI试验对25份非免疫鸡血清检测，再通过攻毒试验，确定了免疫临界线为6log2。HI试验与检测IBV M41抗体的ELISA试剂盒检测结果比较，HI滴度大于6log2时，ELISA S/P值大于0.2；HI滴度小于6log2时，ELISA S/P值小于0.2，HI试验与ELISA有很大的相关性，并具有很强的特异性、重复性和灵敏性。随机选择92份未知血清，分别用HI试验方法和ELISA方法对其进行检测，两种试验检测结果的符合率为92.4％。研究表明，用自制的IBV HI抗原建立的HI试验简便、快速、准确，可应用到IB的诊断、免疫效果监测和流行病学调查研究。

目录

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摘要

文献综述

1鸡传染性支气管炎(IB)

2鸡传染性支气管炎的诊断

参考文献

第一章鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第二章检测IBV抗体的HI试验的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第三章检测IBV抗体的HI试验与ELISA相关性比较

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

致谢