AREG、ESR和FSHβ亚基基因与猪产仔数关系研究

摘要

本研究以小梅山和大约克猪为研究对象，研究AREG、ESR和FSHβ亚基基因与产仔数性状的相关性，探讨利用标记辅助选择方法提高窝产仔数的可行性，为开展猪的联合育种工作提供理论依据，以达到提高养猪业技术水平和经济效益的目的。 试验采集116头小梅山猪和144头大约克猪的耳组织，应用苯酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA，以此为模板，利用3对不同的引物分别扩增AREG、ESR和FSHβ亚基基因，应用RFLP方法对AREG和ESR基因进行基因多态性判定，对FSHp亚基基因PCR扩增产物直接进行基因多态性判定。应用SPSS数据统计分析软件分别分析AREG、ESR和FSHB亚基基因不同基因型频率和基因频率，分析AREG、ESR和．FSHβ亚基基因不同基因型以及不同合并基因型与头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数的关系。结果表明： 1 利用一对引物，选用限制性内切酶StyI，分析了小梅山和大约克猪AREG基因的RFLP多态性。在AREG基因中存在一个StyI酶切位点多态性，结果表现出AA、AB和BB三种基因型。在小梅山猪中只存在AB和BB两种基因型，等位基因A和B的频率分别为14.6％和85.4％；在大约克猪中只存在AA和AB两种基因型，等位基因A和B的频率分别为91.0％和9.0％。 2利用一对引物，选用限制性内切酶PvuⅡ，分析了小梅山和大约克猪ESR基因的RFLP多态性。在ESR基因的E区中，存在一个PvuⅡ酶切位点多态性，表现出三种基因型AA、AB和BB。在小梅山猪中这三种基因型都存在，等位基因A和B的频率分别为35.3％和64.7％；在大约克猪中这三种基因型也都存在，等位基因A和B的频率分别为40.9％和59.1％。 3利用一对引物，分析了小梅山和大约克猪FSHβ亚基基因的PCR长度多态性，表现出三种基因型AA、AB和BB。在小梅山猪中只存在AA和AB两种基因型，等位基因A和B的频率分别为83.6％和16.4％；在大约克猪中只存在AB和BB两种基因型，等位基因A和B的频率分别为6.9％和93.1％。 4对小梅山猪来说，单个基因基因型效应分析结果表明，AREG基因基因型为BB型的母猪比AB型的母猪头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数分别高1.040头/胎、1.487头/胎、0.944头/胎和0.499头/胎。ESR基因基因型为BB型的母猪比AA型的母猪头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数分别高2.895头/胎、2.877头/胎、1.755头/胎和2.105头/胎。FSHβ基因基因型为AB型的母猪比AA型的母猪头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数分别高1.096头/胎、1.27l头/胎、0.953头/胎和0.665头/胎。合并基因型基因效应分析结果表明，AREG、ESR和FSHB三种基因存在8种合并基因型，头胎总产仔数合并基因型BBBBAA最高，合并基因型ABAAAA最低，相差4.045头/胎；头胎产活仔数和经产胎总产仔数合并基因型BBABAB最高，合并基因型ABAAAA与合并基因型BBAAAA相等且为最低，分别相差4.063头/胎和2.188头/胎；经产胎产活仔数合并基因型BBBBAA最高，合并基因型ABAAAB最低，相差3.705头/胎。 5对大约克猪来说，单个基因基因型效应分析结果表明，AREG基因基因型为AB型的母猪比AA型的母猪头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数分别高0.416头/胎、0.234头/胎、0.564头/胎和0.470头/胎。ESR基因基因型为BB型的母猪比AA型的母猪头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数分别高1.754头/胎、1.771头/胎、3.368头/胎和3.236头/胎。FSHβ基因基因型为BB型的母猪比AB型的母猪头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数分别高1.684头/胎、1.800头/胎、1.277头/胎和1.684头/胎。合并基因型基因效应分析结果表明，AREG、ESR和FSHβ三种基因存在9种合并基因型，头胎总产仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数合并基因型ABBBBB最高，合并基因型AAABAB最低，分别相差4.667头/胎、4.300头/胎和5.667头/胎；头胎产活仔数合并基因型ABBBBB最高，合并基因型ABAABB最低，相差4.333头/胎。 根据以上实验结果得出如下结论：l同一种基因在不同的猪群体中基因频率和基因型频率不同，有些群体甚至缺失某种基因型。2对小梅山和大约克猪群而言，AREG、ESR和FSHβ亚基基因的B等位基因均有利于其头胎总产仔数、头胎产活仔数、经产胎总产仔数和经产胎产活仔数的增加。3合并基因型的遗传效应高于单个基因的遗传效应但不是各个基因型效应的简单加和。4在小梅山和大约克猪群选种工作中，利用分子标记辅助选择方法，如果能增加B等位基因频率，则就可相应的增加母猪窝产仔数和产活仔数。

目录

声明

摘要

前言

1猪窝产仔数研究背景

2猪多产性的常规选择方法

2.1直接选择

2.2对多产性的间接选择

3与猪多产性有关的生殖激素

3.1雌激素

3.2促卵泡素(FSH)

3.3促黄体素(LH)

3.4孕激素

4畜禽数量性状基因的遗传标记方法

4.1 RFLP标记

4.2 DNA指纹(DNA fingerprint，DFP)标记

4.3随机引物扩增多态性(RAPD)标记

4.4微卫星标记

4.5 AFLP标记

4.6 PCR-SSCP标记

5分子标记与QTL位点的连锁分析方法

6 AREG、ESR和FSHβ亚基基因的研究进展

6.1 AREG基因的研究进展

6.2 ESR基因的研究进展

6.3 FSHβ基因的研究进展

7基因组DNA的提取

8 PCR扩增的影响因素

9本研究的目的和意义

材料与方法

1试验材料

2器材与试剂

2.1主要仪器设备

2.2主要药品及试剂

2.3缓冲液及主要试剂的配制

3试验方法

3.1样本采集

3.2耳组织样DNA的提取

3.3基因组DNA纯化

3.4 DNA浓度和质量的检测

3.5引物的设计与合成

3.6 PCR反应

3.7 PCR扩增产物电泳检测与鉴定

3.8 PCR产物酶切

3.9酶切产物电泳检测

3.10聚丙稀酰胺凝胶电泳

3.11基因型分析

3.12统计方法

结果与分析

1基因组提取结果

2 PCR扩增结果和基因型分析

2.1 AREG-PCR扩增结果和基因型分析

2.2 ESR-PCR扩增结果和基因型分析

2.3 FSHβ PCR扩增结果和基因型分析

3相关统计分析结果

3.1小梅山和大约克猪AREG、ESR和FSHβ基因参数值

3.2 AREG不同基因型与产仔数关系

3.3 ESR不同基因型与产仔数关系

3.4 FSHβ不同基因型与产仔数关系

3.5小梅山猪AREG、ESR和FSHβ合并基因型与母猪产仔数关系

3.6大约克猪AREG、ESR和FSHβ合并基因型与母猪产仔数关系

讨论

1 AREG、ESR和FSHβ亚基基因多态性分析

2 AREG基因多态性与产仔数关系

3 ESR基因和FSHβ亚基基因多态性与产仔数关系

4 AREG、ESR和FSHβ亚基基因合并基因型与产仔数关系

结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文