番茄灰霉病菌的分离与毒素的提取、纯化及生物测定

摘要

由灰葡萄孢菌侵染引起的番茄灰霉病是当前番茄生产上重要的世界性病害，尤以设施栽培条件下发生较重。番茄灰霉菌的寄主很广，已报道的寄主至少有235种，它能危害多种粮食作物、经济作物、蔬菜和观赏植物。 从番茄、草莓、莴苣上采集了30个灰霉菌菌株，对其进行了形态鉴定、ITS序列比对及系统发育树的构建。结果表明，ITS区长度基本一致，约为500bp。通过序列比对，所获得的菌株序列与基因序列库中已知灰霉菌序列高度同源。 文中对采集的30个灰霉菌菌株进行了灰霉菌株致病力的测定。结果表明，成株期病情指数从12.9到89.6，苗期从4.4到80.6，各菌株在致病力上存在显著差异。BC-5、BC-9、BC-16和BC-21四个菌株表现出较高的病情指数，分别为69.8，52.4，50.0和63.1。 毒素是植物病原物的次生代谢产物，在病原物致病过程中有重要作用。研究毒素能够进一步明确病原物致病因子，为解析病原物的致病机理提供依据。灰葡萄孢(Botrytis cinerea)在液体培养时可以产生毒素。病菌培养滤液经乙酸乙酯萃取后旋转蒸发，可得到毒素粗提液。本研究选用4个致病力较强的灰霉菌株BC-5、BC-9、BC-16和BC-21，对其毒素粗提液进行提取和生物测定结果表明，毒素能使番茄幼苗产生萎蔫症状，随着毒素浓度的增大和处理时间的增长，番茄幼苗萎蔫越明显：菌株培养时间越长产生的毒素活性越强。因此灰葡萄孢毒素对番茄植株具有明显的毒害作用。 本试验从培养液种类、培养时间等角度研究了影响病菌产生粗毒素的因子。明确了病菌较好产粗毒素的培养条件是：培养液为查彼培养液，培养温度为25℃，培养时间为14～21d，培养过程中不需要光照，需要振荡。 毒素粗提液经薄层层析分离，发现毒素能产生2-6条层析带，Rf值从0.149到0.663。4个菌株中分别有一条Rf值相近的条带，表明可能是毒素的有效成分。 本研究利用分子标记SSR对除BC-25以外的29个灰霉菌株进行了遗传多样性分析。7个SSR引物得到29条带，多态性条带比率为82.76％，通过UPGMA聚类分析，SSR标记将29个菌株分为3类。 应用13个灰霉菌株对灰葡萄孢分生孢子的产生条件进行了研究。结果表明，随着ABA浓度的增大，菌核产生量越大。ABA对菌丝的生长速率影响不大。孢子形成培养基更有利于孢子的形成；不同培养基对菌核的产生影响不大。

目录

文摘

英文文摘

声明

上篇 文献综述

1.灰霉病的研究

1.1灰霉病病菌的侵染

1.2灰霉病病菌分化

2.番茄抗灰霉病育种

2.1番茄抗灰霉病育种

2.2番茄灰霉病诱导抗性研究

3.真菌毒素的研究

3.1真菌毒素的分类

3.2真菌毒素的类型和致病作用

3.3真菌毒素的产生条件

3.4真菌毒素的提取

3.5真菌毒素的纯化

3.6真菌毒素生物活性测定

4.灰葡萄孢毒素的研究

5.本研究的目的与意义

下篇 研究内容

第一章 番茄灰霉病病菌的分离、鉴定和致病性测定

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第二章 番茄灰霉病菌毒素的提取、生物测定和初步分析

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第三章 灰霉病菌SSR遗传多样性分析

1.材料与方法

2结果与分析

3.讨论

第四章 灰霉病菌产孢条件的研究

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第五章 全文讨论与结论

1.全文讨论

2.全文结论

参考文献

附录

致谢