脲酶-波氏法测定饲料中尿素及无机氮类物质的研究

摘要

随着我国集约化养殖业规模的扩大，畜禽的存栏量迅速增长，但与此同时也带来了诸如畜禽粪便环境污染、动物性食品安全、人畜争粮等问题，其中后者是限制畜禽养殖进一步发展的主要瓶颈。据资料报道，我国2000年的蛋白质饲料缺口为1190万吨，相当于3216万吨饼粕或1.7万吨谷物的蛋白含量，这一趋势近年来还在发展。而要解决这一问题，一方面要大力推广草食家畜(禽)的养殖，另一方面也要加大开发其他蛋白类饲料的力度。当前国内已经有企业开始生产混有非蛋白氮物质的反刍动物专用饲料，这些饲料一方面能够以其低价格优势在市场竞争中赢得客户，另一方面也降低了养殖行业对于蛋白质类饲料的依赖程度。不过目前国内并没有很好地建立起非蛋白氮饲料生产的监管体系，导致目前市场上产品类型众多、产品质量参差不齐，还有一些生产厂家没有对产品应用做出详细说明致使在生产中出现了很多误用、滥用的情况。
　　 尿素及硫酸铵等无机氮类物质常被用来添加入反刍动物等的饲料中作为蛋白质补充料使用，一方面可以发挥反刍动物利用非蛋白氮类物质的优势，另一方面能够节约饲料成本。但也有一些不法厂商通过将此类物质添加到鱼粉等饲料原料或不能够利用此类物质的单胃动物饲料中来替代其中的一些蛋白质饲料，降低生产成本，以获取不正当利益。
　　 目前，有关标准对此类物质的检测主要是针对尿素，例如ISO66541991(E)和AOAC的动物饲料中尿素含量的测定方法以及国家水产质量监督检验中心制定的鱼粉中掺加尿素含量的测定(GB/T19164-2003)等国际国内标准。这些标准中都一致推荐使用对二甲基苯甲醛法作为饲料中尿素含量检测的首选方法，不过从查阅到的资料中发现，该方法应用的并不是很多，且文章中报道的内容大多数是对这些标准规定的延伸。从各标准及文章中关于该方法的描述来看，该方法的特异性较差且提供的样品前处理过程复杂。这或许是限制该方法在生产中应用的一个主要原因。
　　 本研究通过将广泛应用于临床医学及其他领域的脲酶-波氏比色法进行适当改良，使其能够适用于分别测定饲料中的尿素和其他无机氮类物质的含量。试验结果表明，该方法在实际饲料样品测定中表现出了较好的效果，具有简单、准确、灵敏、特异等优点。该反应体系测定饲料样品中尿素及其他无机氮类物质含量时，反应溶液中含氮量的最佳线性浓度范围为0～40μg、方法的最低检测限为0.095μgN，样品中尿素最低检测浓度为0.41mg/kg；反应中饲料样品的处理采用加水、酶解、离心的方式进行；在实际饲料样品的测定中该方法表现出了具有良好的准确性、精密性和重复性，不同尿素浓度下，各样品间的添加回收率均在98％以上，且变异幅度较小，RSD均在5％以内；饲料中可能存在的VB1、Lys、葡萄糖和氯化钠等不会对反应体系产生干扰作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

第一章前言

1选题背景

2尿素的营养作用

2.1反刍动物

2.2家兔

2.3 鱼

2.4鸡

3尿素的毒性作用

3.1尿素对可利用尿素动物的毒性作用

3.2尿素对不能利用尿素动物的毒性作用

4尿素的检测方法

4.1 DMAB法

4.2酶解-波氏比色法

5本研究的目的与意义

第二章 脲酶-波氏法检测尿素及无机氮类物质方法的建立

1 材料与方法

1.1试剂

1.2主要仪器

1.3脲酶-波氏反应操作步骤及标准曲线的建立

1.4反应溶液稳定性的测定

1.5其他非蛋白氮物质对反应影响

2结果与讨论

2.1反应溶液最适吸收波长

2.2反应的合适线性范围

2.3反应溶液的稳定性

2.4其他物质对反应的影响

第三章饲料样品前处理方法的建立

1材料与方法

1.1试剂

1.2样品

1.3主要仪器

1.4脲酶合适工作浓度的确定

1.5饲料及原料前处理方法的建立

2结果与讨论

2.1脲酶的合适工作浓度

2.2样品的前处理效果

第四章　脲酶波氏法检测饲料中尿素及其他无机氮类物质含量方法的验证

1　材料与方法

1.1试剂

1.2样品

1.3仪器

1.4反应准确性与精密性的测定

1.5反应重复性的测定

1.6反应抗干扰性能的测定

2结果与讨论

2.1反应的准确性和精密性

2.2不同尿素添加浓度和样品间的重复性

2.3不同操作人员间的重复性

2.4反应的抗干扰能力

第五章全文讨论与结论

1 讨论

2结论

参考文献

致谢