不同胆汁引流方式对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜机械屏障功能的影响及机制

摘要

目的:本实验建立梗阻性黄疸(OJ)大鼠模型，并对此模型施行不同的胆汁引流方式—胆汁内引流术和胆汁外引流术。通过观察术后各组大鼠肠黏膜组织形态学变化，检测血清中内毒素水平、肠黏膜细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达以及肠黏膜组织紧密连接相关蛋白—闭锁蛋白和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的表达，探讨不同胆汁引流方式对OJ大鼠肠黏膜机械屏障功能的影响及机制。从而为临床上对OJ患者选择何种胆汁引流方式提供一定的理论依据。
　　方法:将60只SD大鼠采用胆总管结扎法制作OJ模型，1周后随机均分为无引流组（不行胆汁引流术），内引流组（行胆汁内引流术）和外引流组（行胆汁外引流术），引流时间为1周。以20只假手术大鼠为对照组，实验时间共2周，结束时分别用ELISA法、IHC法和Western blot法检测各组大鼠血清内毒素水平、肠黏膜细胞PCNA和Caspase-3的表达和肠黏膜组织闭锁蛋白及ZO-1的表达，并观察肠黏膜组织形态学改变。
　　结果:
　　1、血清内毒素水平的变化:无引流组和外引流组OJ大鼠血清内毒素水平明显升高，与对照组比较，差异均有统计学意义，而无引流组与外引流组间比较，差异无统计学意义;内引流组较无引流组和外引流组明显下降，基本接近对照组水平。
　　2、肠黏膜细胞PCNA的表达:无引流组、内引流组和外引流组OJ大鼠肠黏膜细胞PCNA的表达明显下降，与对照组比较，差异均有统计学意义，而内引流组和外引流组较无引流组明显升高，差异有统计学意义;内引流组较外引流组亦明显升高，差异有统计学意义。
　　3、肠黏膜细胞Caspase-3的表达:无引流组、内引流组和外引流组OJ大鼠肠黏膜细胞Caspase-3的表达明显升高，与对照组比较，差异均有统计学意义，而内引流组和外引流组较无引流组明显下降，差异有统计学意义;内引流组较外引流组亦明显下降，差异有统计学意义。
　　4、肠黏膜组织紧密连接相关蛋白—闭锁蛋白和ZO-1的表达:与对照组比较，无引流组和外引流组OJ大鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接相关蛋白—闭锁蛋白和ZO-1的表达均明显降低，且外引流组两者表达水平降低尤为明显，与无引流组比较，差异有统计学意义;内引流组的表达水平明显高于无引流组和外引流组，基本接近对照组。
　　5、肠黏膜的光镜表现:无引流组和外引流组OJ大鼠肠黏膜结构破坏，大量或中量炎性细胞浸润，而内引流组OJ大鼠组肠黏膜结构完整，仅见少量炎性细胞浸润。
　　结论：胆汁内引流对OJ大鼠肠黏膜机械屏障具有保护作用，其机制可能与胆汁保护肠黏膜上皮细胞以及肠黏膜上皮细胞间紧密连接相关蛋白的表达有关。