单宁酸对布氏田鼠下丘脑黑色素浓集激素和食欲素表达的影响

摘要

单宁为重要的植物次生化合物，影响动物的取食行为。动物下丘脑是调节取食的主要中枢，其中食欲素(Orexin)和黑色素浓集激素（melanin concentrating hormone，MCH）是下丘脑中的两种重要神经肽，它们是影响啮齿动物取食的关键食欲因子。布氏田鼠为内蒙古草原主要植食性动物。本研究以室内繁殖的布氏田鼠为研究对象，在布氏田鼠舌表面滴灌不同剂量（0、3％及6％，分别为对照、低剂量及高剂量组）的单宁酸溶液2h后或连续滴灌5d、10d和20d后，用荧光实时定量PCR方法测定其下丘脑MCH前体蛋白(precursorsprotein of MCH，pp-MCH)和Orexin前体蛋白(precursors protein of Orexin，pp-Orexin)及相关受体mRNA转录水平;用Western blot方法检测定它们的蛋白表达量;并定期测定其日取食量、体重及囤积脂肪。探讨植物次生化合物影响啮齿动物下丘脑食欲肽表达的神经机制，阐明植物次生化合物在调控动物取食行为中的重要作用，为草原动植物间的协同进化提供理论依据。研究结果如下:
　　1、在5d、10d和20d的单宁酸处理后，各处理组布氏田鼠体重与对照组之间没有显著差异。
　　2、在处理10d后，单宁酸降低布氏田鼠的取食量;而处理20d后，单宁酸又会增加布氏田鼠的取食量。
　　3、在单宁酸处理5d和10d后，布氏田鼠的脂肪囤积指数与对照组之间没有差异，而到第20d时，单宁酸降低布氏田鼠的脂肪囤积。
　　4、基因与蛋白表达的结果显示，单宁酸处理2h后，处理组雌雄布氏田鼠pp-MCHmRNA转录水平和蛋白含量与对照组间没有显著差异。受体基因MCHR1(typeⅠ receptor ofMCH)的mRNA转录水平在雄性布氏田鼠的处理组和对照组间也没有差异，而在雌性布氏田鼠中，单宁酸却抑制了MCHR1基因的mRNA转录水平。在5d、10d和20d各处理组中，单宁酸均抑制了雌雄布氏田鼠pp-MCH基因、受体基因MCHR1 mRNA转录水平和pp-MCH蛋白的表达。
　　单宁酸处理处理2小时后，单宁酸促进雌雄性布氏田鼠pp-Orexin基因和受体OX1R（typeⅠ receptor of Orexin）基因的mRNA的转录，对pp-Orexin蛋白表达却无影响;处理5d后，单宁酸抑制雌雄田鼠pp-Orexin基因、受体OX1R基因mRNA转录和pp-Orexin蛋白的表达;但在连续处理10d和20d后，单宁酸使雄性田鼠的pp-Orexin基因、OX1R基因mRNA转录水平和pp-Orexin蛋白的表达增加;但单宁酸仍然抑制雌性布氏田鼠pp-Orexin基因mRNA转录和蛋白表达以及OX1R基因mRNA的转录。受体OX2R(typeⅡ receptor ofOrexin)基因mRNA转录水平在雌雄布氏田鼠中表达趋势相同，在处理2h后，单宁酸促进了OX2R基因mRNA转录，而在处理5d、10d和20d后，单宁酸抑制了OX2R基因的转录。
　　以上结果表明，单宁酸在较短的时间内能抑制布氏田鼠的取食，而随着处理时间的增加，布氏田鼠又会以增加取食为对策来抵御单宁酸造成的影响;虽然在长时间单宁酸处理后，脂肪囤积量在逐渐下降，但布氏田鼠通过调节能量平衡来维持体重保持不变。单宁酸抑制雌雄布氏田鼠pp-MCH基因mRNA转录和蛋白表达以及受体MCHR1基因的转录。但对pp-Orexin的影响比较复杂，这种基因及其受体的表达表现出性分化现象。总之，单宁酸可以通过影响下丘脑相关食欲神经肽的表达来调控布氏田鼠的食欲及取食行为。

目录

摘要

缩略词语汇表

1 文献综述

1．1 植物次生代谢物

1．1．1 植物次生代谢物的分类

1．1．2 单宁对动物的影响

1．2 味觉信息的传导机制

1．3 MCH／OX食欲肽

1．3．1 MCH及受体

1．3．2 OX及受体

1．3．3 MCH和OX的相互关系

1．4 布氏田鼠

2 研究目的与意义

3 材料与方法

3．1 实验仪器

3．2 主要试剂

3．3 实验动物

3．4 实验方法

3．4．1 动物分组及体重、取食量和囤积脂肪的测量

3．4．2 荧光定量PCR检测布氏田鼠下丘脑pp-MCH、MCHR1、pp-OX、OX1R和OX2R mRNA转录水平的变化

3．4．3 Western blot检测布氏田鼠下丘脑中pp-MCH蛋白和pp-OX蛋白的表达

3．5 数据处理

4 结果

4．1 单宁酸对布氏田鼠体重的影响

4．2 单宁酸对布氏田鼠取食量的影响

4．3 单宁酸对布氏田鼠囤积脂肪的影响

4．4 单宁酸对布氏田鼠下丘脑pp-MCH、MCHR1、pp-OX、OX1R和OX2R基因mRNA转录水平的影响

4．4．1 下丘脑总RNA的提取

4．4．2 下丘脑pp-MCH、pp-OX、OX1R和OX2R基因cDNA的部分片段克隆及测序

4．4．3 目的基因和内参基因实时荧光定量PCR引物的鉴定

4．4．4 单宁酸对雄性布氏田鼠下丘脑pp-MCH、MCHR1、pp-OX、OX1R和OX2R mRNA转录水平的影响

4．4．5 单宁酸对雌性布氏田鼠下丘脑pp-MCH、MCHR1、pp-OX、OX1R和OX2R mRNA转录水平的影响

4．5 单宁酸对布氏田鼠下丘脑pp-MCH和pp-OX表达的影响

4．5．1 单宁酸对雄性布氏田鼠下丘脑pp-MCH和pp-OX表达的影响

4．5．2 单宁酸对雌性布氏田鼠下丘脑pp-MCH和pp-OX表达的影响

5 讨论

参考文献

致谢

攻读学位期间论文发表和参加课题情况

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