鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留柱前衍生-液相色谱荧光检测法的研究

摘要

本研究旨在建立鸡组织（肌肉、肾脏、肝脏）、鸡蛋（全蛋、蛋清、蛋黄）及猪肉中哌嗪残留柱前衍生液相色谱荧光检测(LC-FLD)方法。以京海黄鸡和三元（杜×长×约）杂交猪为试验样品，采用加速溶剂萃取(ASE)和固相萃取(SPE)技术提取、净化样品，建立LC-FLD方法。其主要研究结果如下:
　　1.优化了哌嗪与丹磺酰氯(DNS-Cl)衍生反应的条件，并确证了哌嗪在优化的条件下发生单取代反应。即移取1.0μg/mL哌嗪100μL，1.0mg/mL DNS-Cl600μL和0.12％三乙胺100μL于10mL离心管中，在50℃条件下避光反应20min，生成单取代物1-丹磺酰基哌嗪(1-DNS-piperazine)。
　　2.优化了利用加速溶剂萃取(ASE)技术提取鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留的方法。即在80℃，1500psi条件下，用正己烷去脂，2％甲酸乙腈提取鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留。该方法快速、提取效率高。
　　3.建立了鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留高效液相色谱荧光检测(HPLC-FLD)方法。采用Athena C18(4.6×250mm，5μm)作为色谱柱，流动相为水-乙腈体系，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温为25℃，激发波长和发射波长分别为330nm和531nm。结果显示:哌嗪在鸡组织、鸡蛋及猪肉中添加浓度在定量限(LOQ)～200.0μg/kg范围内衍生产物峰面积与哌嗪浓度呈良好的线性关系，决定系数R2≥0.9992。哌嗪添加浓度为LOQ、0.5MRL、1.0MRL和2.0MRL时，在鸡组织中的回收率为78.49％～97.56％，日内相对标准偏差(RSD)为2.52％～5.42％，日间RSD为3.32％～6.46％，检测限(LOD)和LOQ分别为0.96～1.85μg/kg和3.20～5.50μg/kg;在鸡蛋中的回收率为72.86％～89.26％，日内RSD为2.46％～6.07％，日间RSD为3.08％～6.48％，LOD和LOQ分别为1.92～2.50μg/kg和6.50～7.50μg/kg;在猪肉中的回收率为86.92％～91.13％，日内RSD为3.71％～4.65％，日间RSD为4.75％～7.06％，LOD和LOQ分别为1.15μg/kg和3.52μg/kg。
　　4.建立了鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留超高效液相色谱荧光检测(UPLC-FLD)方法。色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)，流动相为水-乙腈(15∶85，V∶V)，流速为0.2mL/min，柱温为25℃，激发波长和发射波长分别为330nm和531nm。结果显示:哌嗪在鸡组织及猪肉中添加浓度为LOQ～200.0μg/kg，在鸡蛋中添加浓度为LOQ～400.0μg/kg时，衍生产物峰面积与哌嗪浓度都呈良好的线性关系，决定系数R2≥0.9991。哌嗪添加浓度为LOQ、0.5MRL、1.0MRL和2.0MRL时，在鸡组织中的回收率为79.64％～99.77％，日内RSD为2.62％～6.71％，日间RSD为3.52％～7.77％，LOD和LOQ分别为0.50～1.20μg/kg和1.80～3.50μg/kg;在鸡蛋中的回收率为77.07％～89.90％，日内RSD为2.44％～5.19％，日间RSD为3.10％～6.63％，LOD和LOQ分别为1.05～1.32μg/kg和3.50～4.20μg/kg;在猪肉中的回收率为87.10％～94.71％，日内RSD为2.50％～6.25％，日间RSD为2.58％～6.44％，LOD和LOQ分别为0.62μg/kg和1.85μg/kg。该方法高效、灵敏，为哌嗪检测提供了新的方法。
　　5.本研究对比了两种检测方法。结果发现，与HPLC-FLD相比，UPLC-FLD具有分析效率高、流动相消耗少、灵敏度更高等优点，适合在批量样品分析。两者均满足哌嗪残留检测的需求。

目录

论文说明

摘要

符号说明

第一章 文献综述

1 哌嗪理化性质

2 哌嗪的作用机理及应用

2．1 作用机理

2．2 哌嗪的应用

3 样品前处理技术

3．1 液-液萃取技术

3．2 固相萃取技术

3．3 加速溶剂萃取技术

3．4 衍生化反应

4 哌嗪的检测方法

4．1 滴定法

4．2 比色法

4．3 分光光度法

4．4 气相色谱法

4．5 气相色谱-串联质谱法

4．6 液相色谱法

4．7 液相色谱-串联质谱法

5 研究目的和意义

5．1 研究目的

5．2 研究意义

第二章 鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留柱前衍生-高效液相色谱荧光检测法的研究

1 材料与方法

1．1 试剂与材料

1．2 主要仪器

1．3 主要溶液配制

1．4 试验设计与样品采集

1．5 衍生方法的优化

1．6 样品提取方法

1．7 样品净化与浓缩

1．8 样品复溶与衍生化

1．9 检测方法的建立

2 结果与分析

2．1 衍生方法的优化

2．2 样品前处理方法的优化

2．3 色谱条件优化

2．4 标准曲线、线性范围与决定系数的确定

2．5 空白基质添加哌嗪的回收率和精密度

2．6 哌嗪检测限与定量限

2．7 重复性试验

2．8 标准品配制与稳定性

3 讨论

3．1 衍生方法的优化

3．2 样品前处理方法的优化

3．3 色谱条件的优化

3．4 方法的准确度与精密度

3．5 方法的灵敏度

3．6 重复性试验

3．7 标准品配制与稳定性

3．8 与其他方法的比较

4 小结

第三章 鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留柱前衍生-超高效液相色谱荧光检测法的研究

1 材料与方法

1．1 试剂与材料

1．2 主要仪器

1．3 主要溶液配制

1．4．试验设计与样品采集

1．5 样品提取

1．6 样品净化与浓缩

1．7 样品复溶与衍生化

1．8 检测方法的建立

1．9 基质效应的评价

2 结果

2．1 色谱图

2．2 标准曲线、线性范围与决定系数的确定

2．3 空白基质添加哌嗪回收率和精密度

2．4 哌嗪检测限与定量限

2．5 重复性试验

2．6 HPLC-FLD与UPLC-FLD的比较

2．7 基质效应的评价

3 讨论

3．1 色谱条件的优化

3．2 HPLC-FLD与UPLC-FLD的比较

3．3 基质效应的评价

4 小结

全文结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文及申请发明专利情况

声明