共刺激分子CD40/CD40L和OX40/OX40L在乳腺癌中的表达及其生物学意义

摘要

该课题以乳腺癌为研究对象,探讨CD40、OX40、OX40L等相关分子在甩腺癌细胞上的表达及其临床意义,并在体外以rhCD40L为激动剂研究CD40信号对乳腺癌细胞株生物学行为的影响,为临床的运用提供实验依据和理论基础;并对OX40L进行了基因克隆、表达和生物学特性研究,为研制具有自身知识产权的鼠抗人单克隆抗体和开展相关研究提供了实验手段.一、CD40及相关分子在乳腺癌中的表达及其生物学意义.该研究采用了免疫组织化学方法对58例乳腺癌石蜡切片CD40分子的表达进行检测,发现正常乳腺组织不表达或弱表达CD40分子,而在乳腺癌细胞中均有一定程度的表达,阳性表达率分别为37.9％,与正常乳腺组织的表达有显著性差异(P<0.01).组化结果还显示,58例乳腺癌有21例P53阳性表达(36.2％),与乳腺癌肿瘤分化程度、瘤块大小有关(P<0.05),与局部淋巴结转移无关(P>0.05).VEGF分子在各种病理类型肿瘤中高表达(81％),基表达与乳腺癌肿瘤瘤块大小有关(P<0.05),与分化程度、局部淋巴结转移无关(P>0.05),同时也与CD40、P53分子表达无明显相关性.二、CD40信号对乳腺癌细胞株生物学行为的影响.两株高表达CD40的乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞,经rhCD40L激发后,其HLA-DR分子有不同程度的上调,肿瘤细胞自身高表达CD44和CD54可通过与各自相应配体结合,稳定细胞间接触,增强免疫原性和促进T细胞活化.同时,TR-PCR结果显示肿瘤上皮细胞经CD40激发后T细胞活化和趋化因子RANTES的转录水平上调,推测其编码的蛋白可能参与了对T细胞的趋化和活化.三、人OX40L基因克隆、表达及生物学特性研究.该部分研究在克隆OX40L基因的基础上,构建了pcDNA3.1-OX40L质粒,从而转染小鼠成纤维细胞L929,成功构建转基因细胞L929-OX40L,并进行相关的生物学特性研究.四、OX40、OX40L分子在乳腺癌中的表达及其生物学意义.免疫组化的结果表明OX40、OX40L分子不仅表达在乳腺癌浸润性淋巴细胞上(资料未显示),也异常表达在乳腺肿瘤细胞上,阳性表达率分别为82.7％、53.4％,与正常乳腺组织的不表达或弱表达有显著性差异(P<0.01).对OX40、OX40L阳性过表达与乳腺癌多项临床指标相关性进行了分析,表明OX40、OX40L在乳腺癌中的阳性表达均与肿瘤瘤块大小(P<0.05)有关,二者表现相反的趋势.OX40、OX40L表达均与局部淋巴结转移无关(P>0.05).因此,OX40、OX40L可作为区分正常组织与恶性病变的临床诊断指标之一.在部分病例中OX40与OX40L共表达,但在乳腺肿瘤的建株细胞上均未检测到二者的表达.

目录

文摘

英文文摘

缩写词表

研究背景

一、D40/CD40L的生物学特性、信号转导及与上皮性肿瘤的关系

1.CD40L与CD40分子的生物学特性

2.CD40/CD40L信号转导

3.CD40L-CD40的相互作用在机体免疫应答中的重要地位

4.CD40L/CD40与上皮性组织及肿瘤

参考文献

二、OX40/OX40L生物学特性及其信号转导

第一部分CD40及相关分子在乳腺癌中的表达及其生物学意义

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

附录:Bloom-Richardson系统Nottingham改良方案

第二部分CD40信号对乳腺癌细胞株生物学行为的影响

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分人0X40L基因克隆、表达及生物学特性研究

前言

一、OX40L转基因细胞的构建和生物学特性研究

材料和方法

结果

讨论

参考文献

二、人OX40L在BL-21大肠杆菌中的表达和鉴定

第四部分0X40、OX40L分子在乳腺癌中的表达及其生物学意义

小结

下一步拟开展的工作

研究生学习期间发表的论文及学术交流

致谢