家蚕生物反应器研究——转hGM-CSF基因家蚕及杆状病毒表达SARS-CoV M基因

摘要

桑蚕生物反应器主要有两种形式；转基因桑蚕(transgenicsilkworm)和杆状病毒表达载体系统(BaculovirusExpressionVectorSystem，BEVS)。　　本文将由家蚕核型多角体病毒(BmNPV)IE-1基因启动子及其控制下的hGM-CSF基因克隆到PigA3GFP中，构建了家蚕转基因载体PigA3GFP[IE-GMCSF]，利用压力渗透法和精子介导法将此载体与其辅助质粒helper-pigA3导入家蚕，获得了发绿色荧光的家蚕。提取家蚕基因组DNA用PCR法可检测hGM-CSF基因，推测hGM-CSF基因已整合进家蚕的染色体，对G3代转基因家蚕用ELISA进行hGM-CSF的活性测定，结果表明转基因家蚕冻干粉中hGM-CSF的量为95ng/100mg。　　另外，本文将SARS病毒的M蛋白完整基因克隆进原核表达载体pET28a(+)，在大肠杆菌BL21中诱导表达，分析表明大肠杆菌中表达的重组M蛋白的分子量为28KD，与理论值相符，此外还有一条分子量为18kDa左右的条带，推测与大肠杆菌密码子的偏爱性或表达产物的降解有关；同时将M蛋白基因克隆到杆状病毒转移载体pBacPAK-His中，用BEVS表达了M蛋白。SDS-PAGE、WesternBlotting分析表明，而用杆状病毒表达的重组M蛋白的分子量为30KDa比理论值25.96KDa高，推测与表达产物的翻译后加工如糖基化有关。

目录

文摘

英文文摘

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引言

第一章桑蚕生物反应器研究进展

第一节 桑蚕生物反应器的主要用途

第二节 桑蚕生物反应器生产的外源蛋白

参考文献

第二章冠状病毒与SARS研究进展

第一节冠状病毒概

第二节SARS冠状病毒及研究进展

参考文献

第三章一般材料和分子克隆常用方法

第四章piggyBAC转座子转hGM-CSF基因家蚕研究

摘要

1材料与方法

2方法

3结果和分析

4讨论

参考文献

第五章SARS病毒M蛋白在E.coli和家蚕中的表达研究

摘要

引言

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

附录一 使用的载体图

附录二符号说明(英汉双解缩略词表)

附录三在校期间发表的论文及申请专利

致谢