组织工程骺板的构建及其治疗骺板损伤的实验研究

摘要

一、骺板组织工程种子细胞——兔骺板软骨细胞体外培养及其细胞表型的研究 目的:探索体外培养兔骺板软骨细胞的方法，并对其细胞表型进行初步研究，为骺板组织工程寻找良好的种子细胞。 方法:取两周龄，体重250g左右幼兔胫骨上端骺板，经过机械剪切、胰酶、胶原酶的消化获得细胞后，1640培养基体外培养。 应用倒置显微镜、透射电镜、Alcian blue染色、蕃红花“O”——亮绿染色，免疫组织化学染色、PCR、MTT等方法，对细胞进行定性、定量检测。 结果:在体外观察到了骺板软骨细胞贴壁生长及传代的生长过程，多次传代后增殖能力降低。PCR检测有Ⅱ型胶原的表达、蕃红花“O”——亮绿染色阳性、Alcian blue染色显示第三代细胞蛋白聚糖含量高，MTT显示第三代细胞生长曲线呈倒“S”型，于第12天出现生长抑制。 结论:成功地建立了骺板软骨细胞的体外培养方法，并证实所培养出的细胞是骺板软骨细胞。 二、组织工程骺板的构建——兔骺板软骨细胞分别与多孔聚乳酸、多孔丝素构建两种组织工程骺板并比较其体外相容性 目的:探索兔骺板软骨细胞与生物支架材料复合构建组织工程骺板的可行性。 方法:将体外培养的第三代兔骺板软骨细胞分别与多孔聚乳酸材料、多孔丝素材料复合，构建两种组织工程骺板。应用扫描电镜、激光共聚焦显微镜、MTT等方法，对细胞与材料的相容性进行观察，并对两种生物支架材料进行比较。 结果:兔骺板软骨细胞在支架材料上生长良好，随着培养时间的延长，分裂增殖的细胞逐渐增多。细胞在两种材料上生长情况类似，统计学显示无显著性差异。 结论:多孔聚乳酸材料和多孔丝素材料均具有良好的生物相容性，可以作为骺板组织工程理想的载体材料。 三、组织工程骺板治疗骺板损伤的动物实验研究——两种组织工程骺板分别治疗骺板损伤并对其进行比较 目的:探索组织工程骺板在治疗骺板损伤中的作用。 方法;将两种组织工程骺板分别植入骺板损伤的模型中，同时设单纯植入材料组、空白对照组。应用组织学、BrdU细胞示踪、X线等方法，观察成角畸形和短缩畸形情况。同时对两种组织工程骺板、以及两种支架材料进行比较。 结果;空白组，骨桥明显，短缩畸形和成角畸形显著；单纯植入支架材料组，短缩畸形和成角畸形明显；组织工程骺板组，存在较小的短缩畸形和成角畸形。统计学显示三种方法存在显著性差异，两种组织工程骺板之间，两种支架材料之间无显著性差异。 结论:组织工程骺板治疗骺板损伤是一种有效的方法，其疗效优于单纯植入生物支架材料。 四、人骨骺软骨细胞体外培养及鉴定的初步研究 目的:建立体外培养及鉴定人骨骺软骨细胞的方法。 方法;取人多指切除手术之多指骨骺，先行机械剪切，后用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化，再接种于1640培养基中体外培养。应用蕃红花“O”——亮绿染色，Alcian blue染色，免疫组化Ⅱ型胶原染色和MTT检测，对其生物学特性进行了观察和鉴定。 结果;在体外观察到了人骨骺软骨细胞贴壁生长及传代的生长过程，多次传代后增殖能力降低。蕃红花“O”——亮绿染色阳性。Alcian blue染色阳性。免疫组化Ⅱ型胶原染色阳性。MTT显示生长曲线呈倒“S”型，至第15天细胞出现生长抑制。 结论:成功地建立了人骨骺软骨细胞的体外培养方法，并证实所培养出的细胞是人骨骺软骨细胞。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分 骺板组织工程种子细胞——兔骺板软骨细胞体外培养及其细胞表型的研究

第二部分 组织工程骺板的构建——兔骺板软骨细胞分别与多孔聚乳酸、多孔丝素构建两种组织工程骺板并比较其体外相容性

第三部分 组织工程骺板治疗骺板损伤的动物实验研究——两种组织工程骺板分别治疗骺板损伤并对其进行比较

第四部分 人骨骺软骨细胞体外培养及鉴定的初步研究

结论

综述 骺板损伤的研究进展

发表文章

参研课题

附 图一

附 图二

致 谢