连接蛋白Cx43在炎性痛大鼠脊髓背角的表达及甘珀酸的抗伤害作用

摘要

本研究分为二部分： 第一部分 大鼠佐剂性关节炎性痛模型的建立及其脊髓背角缝隙连接蛋白Cx43表达的变化 目的:研究连接蛋白43(Cx43)在佐剂性关节炎性痛大鼠脊髓背角的表达，以探讨缝隙连接在炎性痛中的可能作用。 方法: 1、行为学研究：取成年雄性大鼠20只，随机分为2组：CFA模型组和NS生理盐水组，每组10只。CFA组在大鼠左后肢踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)50μl。NS组在大鼠相同部位皮下注射NS 50μl。在注射前1d和注射后2h、4h、8h、1d、3d、5d、7d、10d、14d连续测定大鼠双侧的热缩足反射潜伏期(PWTL)和机械缩足反射阈值(PWMT)。 2、形态学研究：20只成年雄性大鼠随机分为4组：NS对照组、C2h组、C3d组和C7d组，每组5只。分别在CFA．致炎后相应时间点取脊髓腰膨大行Cx43免疫组织化学染色分析，测定双侧脊髓背角积分光密度值(IOD)值。 结果: 1、行为学研究结果：单侧踝关节外侧皮下注射CFA可以在致炎后2h～7d诱导出双侧的热痛觉过敏和机械性异常痛，虽然以致炎同侧较为显著(P<0.01)，但是仍呈现明显的镜像现象(P<0.01或0.05)。 2、形态学研究：CFA致炎后，大鼠脊髓双侧Cx43的表达与对照组相比均显著增加(P<0.01或0.05)，主要集中于Ⅰ～Ⅱ层和X层，其时程变化与行为学变化基本一致。 结论: 1、CFA诱导的佐剂性关节炎性痛模型具有明显的继发性痛敏现象(包括域外痛和镜像痛)。 2、佐剂性关节炎大鼠脊髓双侧背角Cx43表达显著增加，提示星形胶质细胞缝隙连接可能参与佐剂性关节炎诱导的病理性疼痛过程。 第二部分 鞘内注射甘珀酸对佐剂性关节炎大鼠的抗伤害作用研究 目的:研究鞘内注射缝隙连接阻滞剂一甘珀酸(CBX)对佐剂性关节炎大鼠的抗伤害作用。 方法:所有大鼠均给予L4-5鞘内置管，5～7d后保留无肢体活动障碍者。 1、首先研究鞘内注射CBX对正常大鼠双侧后爪热缩足反射潜伏期(PWTL)的影响，确定其时效与量效关系。32只雄性大鼠随机分为4组：NS对照组、CBX50组、CBX25组和CBX100组(每组8只)，分别鞘内注射NS 10μl和CBX 25μg、50μg、100μg。在给药前0.5h和给药后0.5h、1～8h(每整点)连续测定大鼠双侧PwTL。 2、行为学研究：成年雄性大鼠40只随机平分为五组，建立佐剂性关节炎模型，随机选择一组在致炎前0．5h鞘内注射CBX 100~g进行预处理，其余四组分别以NS10μl(NS对照)和CBX 25μg、50μg、10μg的剂量在致炎后0.5h、1d、3d、5d、7d、10d、14d鞘内注射，每次给药后2h测定双侧PWTL，并连续观测NS对照组、CBX100和CBX100μg预处理组PWTL在致炎第ld的变化。 3、形态学研究：15只雄性大鼠随机分为3组，每组5只。NS对照组于大鼠左后肢踝关节外侧皮下注射NS 50μl，其它组注射CFA 50μl；3d后NS对照组和CFA模型组鞘内注射NS 10μl，CBX处理组鞘内注射注射CBX 100μg(10μl)。给药后2h，取脊髓腰膨大行c-Fos免疫组织化学染色分析并FLIN计数。 结果: 1、CBX可以可逆性、剂量依赖性地提高正常大鼠的辐射热痛阈(P<0.05或0.01)。在给药后1h大鼠PWTL痛阈就显著增加，2h达到高峰，持续1-2h后逐渐消退。两侧无显著差异。 2、CBX在炎性痛的不同阶段都可以逆转外周CFA诱导的双侧热痛觉过敏(P<0.05或0.01)。致炎前使用CBX预处理可以在致炎第1天延缓痛觉过敏的出现(P<0.01)。 3、单侧踝关节外侧皮下CFA致炎后第3天，大鼠腰段脊髓双侧背角c-Fos蛋白表达显著增加，表现为致炎后FLI神经元数量增加和体积增大。而给予甘珀酸处理，可以逆转这种改变，与CFA组比较，差异具有显著统计学意义(P<0.01)。 结论:作为缝隙连接阻滞剂的甘珀酸对大鼠佐剂性关节炎诱导的病理性疼痛(包括域外痛和镜像痛)具有显著的抗伤害作用，提示缝隙连接可能参与炎性疼痛的中枢敏感化过程。

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文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩略词表

声明

前 言

第一部分大鼠佐剂性关节炎性痛模型的建立及其脊髓背角连接蛋白Cx43表达的变化

实验材料

实验方法

结果

讨 论

参考文献

附图

第二部分鞘内注射甘珀酸对佐剂性关节炎大鼠的抗伤害作用研究

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

附图

结 论

综述缝隙连接与疼痛中枢敏感化

攻读硕士学位期间本人公开发表的论文

致 谢