放射性核素标记胰腺癌靶向药物的初步实验研究

摘要

第一部分放射性核素<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物的实验研究 胰岛素样生长因子-1与胰腺癌等多种肿瘤的发生有着密切的关系。胰腺癌等细胞膜表面有高表达的胰岛素样生长因子-1受体，胰岛素样生长因子-1的类似物能与肿瘤细胞表面高表达的胰岛素样生长因子-1受体结合，并诱导肿瘤细胞凋亡。用<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子-1的类似物有希望作为具有实用价值的胰岛素样生长因子1受体的显像剂，可以对直肠癌、胰腺癌等多种肿瘤做早期的诊断。 目的：建立<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物的方法学，研究胰岛素样生长因子1受体的显像。 方法：(1)通过预锡化法标记胰岛素样生长因子1类似物，改变标记条件：①Tween 80的用量从0～10μL；②分别在5 min、10min、15 min、30min、1h、2h、4h、6h不同时间点测定标记率；③SnCl<,2>·2H<,2>O浓度从0.75～4g/L；④IGF-1A的用量从20～100μg；⑤淋洗液的体积从10～200μL。 (2)用<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物，取不同浓度梯度的人胰腺癌细胞8988(1×10<'8>个/mL、5×10<'7>个/mL、1×10<'7>个/mL、5×10<'6>个/mL、1×10<'6>个/mL)分别进行特异与非特异结合反应。取25只正常的裸鼠分别做5 min，30min，1h，2h，4h的体内分布研究。另取25只裸鼠在注射入人胰腺癌细胞后8周，注射部位肿瘤长至约2cm<'3>，尾静脉注入<'99>Tc<'m>标记的胰岛素样生长因子1类似物后分别在15min，30min，1h，2h，4h，6h，7h对荷胰腺癌裸鼠进行放射受体显像研究以及5min，30min，1h，2h，4h在荷胰腺癌裸鼠体内的分布研究。 结果：(1)<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物最高标记率为(94.43±0.75)％，胶体含量为(3.47±0.71)％。改变标记条件：①随着吐温80的用量的降低，标记率会逐渐的增高，最高标记率为(92.00±1.35)％。但若在反应体系中不添加吐温80,标记率有明显的下降；②标记反应在15min的标记率已达(91.93±2.89)％，随着时间的延长标记率无明显变化；③减少SnCl<,2>2H<,2>O用量，标记率明显下降，当SnCl<,2>·2H<,2>O的量为3 g/L时标记率为(91.90±1.15)％；④标记率随胰岛素样生长因子1类似物用量的增加而增高，最高标记率达(92.77±0.99)％；⑤<'99>Tc<'m> O<,4><'->淋洗液体积为50μL最高标记率达(93.43±0.55)％。 (2)<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物后，与人胰腺癌细胞8988的结合率分别为19.65％、19.35％、19.26％、17.03％、14.72％；尾静脉注入<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物后对裸鼠进行放射受体显像研究，结果表明15min之后肿瘤部位放射性物质浓聚逐渐增高，肿瘤组织放射性强度百分比与肌肉、血液等其它非肿瘤组织放射性强度百分比的比值(T/NT)逐渐升高。 结论：<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物后可以与胰腺癌细胞特异结合。<'99>Tc<'m>标记胰岛素样生长因子1类似物在荷人胰腺癌裸鼠体内显像结果表明其能与胰腺癌组织特异性结合，在胰腺癌的诊断方面有着良好的应用前景。 第二部分放射性核素<'188>Re标记抗人胰腺癌单克隆抗体的方法学研究 目的：探索建立<'188>Re标记抗人胰腺癌单克隆抗体2F4-2C<,9>的方法，探讨<'188>Re-2F4-2 C<,9>在胰腺癌的治疗中应用的可行性。 方法：<'188>Re标记抗人胰腺癌单克隆抗体2F4-2C<,9>采用直接还原法，改变标记条件：①SnCl<,2>·2H<,2>O浓度从12～20g/L；②分别在30min、1h、、2h、3h、5h、7h不同时间点测定标记率；③淋洗液的体积从50～250μL； 结果：(1)塑料管中加入0.2mol/LpH值为6.0的乙酸缓冲液200μL，然后加抗人胰腺癌单抗2F4-2 C<,9> 100μL(0.6g/L)，用0.3mol/L葡萄糖酸钠稀释40μL浓盐酸溶解的200μL Sncl<,2>．2H<,2>O(20g/L)中加入<'188>ReO<,4><'->淋洗液100μL，摇匀后室温放置1小时，二者混合反应后用Sephadex G25层析柱进行纯化分离。 (2)<'188>Re标记抗人胰腺癌单克隆抗体2F4-2 C<,9>：<'188>Re-2F4-2 C<,9>的标记率为66～75％。经Sephadex G25纯化后放化纯度为85～88％。改变标记条件：①当氯化亚锡的浓度为20g/L，标记率最高为(70.70±1.76)％；②随反应时间的延长，标记率增高，标记率最高为(71.57±0.91)％；③淋洗液的体积为100μL时，<'188>Re标记2F4-2 C<,9>标记率为(70.95±1.94)％。 结论：直接还原法，标记<'188>Re-2F4-2 C<,9>方法简便快捷，但放化纯度不高，需进一步纯化。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语词表

声明

研究背景

第一部分放射性核素99Tcm标记胰岛素样生长因子1类似物的实验研究

一99Tcm标记IGF-1A的方法学研究及体外细胞结合实验

材料与方法

结果与分析

讨论

结论

二99Tcm标记IGF-1A的放射受体显像及荷瘤鼠体内分布实验

材料与方法

结果与分析

讨论

结论

参考文献

第二部分放射性核素188Re标记抗人胰腺癌单克隆抗体的方法学研究

一抗人胰腺癌单克隆抗体的制备

材料与方法

二188Re标记单克隆抗体的方法学研究

材料与方法

结果与分析

讨论

结论

参考文献

综述Ⅰ放射性核素标记抗人胰腺癌单克隆抗体的方法学探讨

综述Ⅱ 放射性核素99Tcm标记多肽在胰腺癌中的应用

攻读学位期间论文本人出版或公开发表的论著论文及参与科研课题工作

致谢