纤维蛋白(原)促血管内皮细胞增殖、血管腔样结构形成的机制研究

摘要

目的：探讨纤维蛋白(fibrin)在人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)增殖和血管腔样结构形成过程中的作用，并探讨其可能的影响机制。 方法：1、培养人脐静脉内皮细胞，观察低(0.5mg/ml)、中(3mg/ml)、高(6mg/ml)浓度的纤维蛋白作用下，对新生血管形成的影响；采用MTT和流式细胞法，观察作用最显著组的纤维蛋白对细胞增殖的影响；2、采用实时荧光定量RT-PCR检测不同浓度(0mg/ml、0.5mg/m、1.5mg/ml、3mg/ml、4.5mg/ml、6mg/ml)和时间(6h、12h、24h)的纤维蛋白作用下，MAP1LC3(Microtubule-associatedprotein1lightchain3)的基因表达以及在免疫荧光下晚期自噬囊泡和LC3在胞浆的变化；应用上述浓度和时间检测血管内皮生长因子(VEGF)的基因表达情况；3、采用实时荧光定量RT-PCR检测不同浓度和时间的血管内皮-钙粘蛋白(Vascularendothelial-cadherin；VE-cadherin)和一种新型的肌动蛋白骨架调节分子IQGAP3的表达情况；采用免疫荧光标记法观察纤维蛋白作用下，F-actin骨架蛋白结构的变化。 结果：1、在不同浓度纤维蛋白的干预下，均有血管腔样结构的形成，但以高浓度组(6mg/ml)作用显著；并且，伴随有促进细胞增殖的作用；无纤维蛋白的对照组，未见有血管腔样结构形成。2、在血管腔样结构形成中，伴随有自噬基因LC3的表达变化，呈浓度和时间依赖性增加，免疫荧光染色也表明了晚期自噬囊泡和LC3在胞浆的表达增多，VEGF的表达也随着自噬的激活而增加。3、在血管腔样结构形成中，VE-cadherin的表达随着纤维蛋白浓度和时间变化呈增加趋势，尤其在高浓度组，具有统计学意义：而F-actin则在细胞的周边以及胞核周围由分布均匀变成失去极性的应力纤维。IQGAP3基因表达伴随着VE-cadherin的变化也呈现了上升趋势。 结论：1、不同浓度的纤维蛋白均可以促进血管内皮细胞形成血管腔样结构，但以高浓度组(6mg/ml)显著，呈现一定的浓度和时间趋势。 2、在血管形成中，伴随有自噬的发生，且呈时间和浓度依赖性，提示了自噬在纤维蛋白促进内皮细胞增殖中起了一定作用，并与VEGF、VE-cadherin、IQGAP3表达和细胞骨架改变有关。

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讨 论

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文献综述 纤维蛋白和血管内皮-钙粘蛋白分子在动脉粥样硬化中的作用

攻读学位期间公开发表的论文

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