二十二碳六烯酸对大鼠心室肌及冠状动脉平滑肌的细胞电生理研究

摘要

目的：二十二碳六烯酸(DHA)在预防、减少心血管疾病发生，尤其是在抗心律失常、扩张血管、降低血压、增加冠状动脉血流量及预防心源性猝死等方面的有益作用受到广泛重视。但DHA引起的对心血管有益作用的机制尚不完全清楚。本研究拟采用膜片技术探讨DHA对大鼠心室肌细胞静息电位(RP)、动作电位(AP)、离子通道动力学以及对冠状动脉平滑肌细胞离子通道动力学的影响，旨在从细胞离子通道电生理水平上阐述DHA起到的抗心律失常、扩张血管等心血管有益作用的可能机制。为临床使用DHA提供理论依据。 方法： (1)采用“四步”酶消化法，即无钙台氏液灌流、50μmol/L低钙酶液灌流、200μmol/L低钙台氏液灌流和室温下KB液中孵育。分离大鼠心室肌细胞后，记录正常大鼠心室肌细胞RP、AP、钠离子电流(INa)、L-型钙离子电流(ICa-L)、瞬时外向钾离子电流(Ito)、延迟整流性钾离子电流(Ik)和内向整流性钾离子电流(Ik1)。分别加入20、40、60、80、100和120μmol/L DHA，观察不同浓度DHA对RP、AP、INa、ICa-L、Ito、Ik和Ik1影响。 (2)采用“三步”酶消化法，即含0．125％牛血清白蛋白(BSA)缓冲液室温孵育10分钟，酶液I消化20分钟，酶液II消化15分钟。分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞后，记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾(BKCa)电流、电压依赖性钾(Kv)电流。分别加入10、20、40、60和80μmol/L DHA，观察不同浓度DHA对IBKCa、IKv影响。 结果： (1)通过“四步”酶消化法，可获得70％～90％的耐钙细胞。 (2)正常大鼠心室肌细胞RP、AP和离子流。 (3)DHA对心室肌细胞基本电生理影响。 (4)DHA对心室肌细胞离子流影响。 (5)正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞IBKCa和IKv。 (6)DHA对大鼠冠状动脉平滑肌细胞IBKCa和IKv影响。 结论： (1)对大鼠心室肌细胞电生理影响：①DHA使APD25、APD50、APD90延长，对Vmax、APA、OS无影响。②DHA对INa、ICa-L、Ito、IK均有阻滞作用，使这些通道电流稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长，对稳态激活曲线无影响。③DHA对IK1电流大小和通道动力学参数均无影响。④DHA具备多通道阻滞，从而对预防心律失常和心源性猝死起有益作用。 (2)对大鼠冠状动脉平滑肌细胞电生理影响：①DHA对单通道BKCa有激活作用，使单通道BKCa开放相对概率与钳制电压关系曲线左移。②DHA对全细胞BKCa有激活作用，对稳态激活曲线无影响。③DHA对全细胞Kv有抑制作用，稳态激活曲线右移、稳态失活曲线左移。④DHA激活BKCa通道作用大，抑制Kv通道作用小，综合电生理影响增加冠脉复极电流，从而起舒血管作用。大鼠

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词英汉对照表

声明

前言

第一章正常大鼠心室肌细胞分离

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、参考文献

第二章正常大鼠心室肌细胞动作电位和离子流的记录及特点

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、参考文献

第三章二十二碳六烯酸对大鼠心室肌细胞动作电位和离子电流的影响

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、参考文献

第四章大鼠冠状动脉平滑肌细胞分离及细胞钾通道电流的记录及特点

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、参考文献

第五章二十二碳六烯酸对大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾通道的影响

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、参考文献

论文总结

综述：血管平滑肌细胞膜上钾通道的研究进展

三年学习期间以第一作者发表在SCI收录期刊及国内北图核心期刊的论文

致谢