骨髓增生异常综合征患者JAK2和TET2基因突变的检测及临床意义

摘要

目的:2005年国际上多个研究小组几乎同时报道在骨髓增殖性肿瘤(MPN)中发现JAK2V617F突变,但在骨髓增生异常综合征(MDS)中发病率较低。国外报道JAK2V617F突变在MDS患者中的发生率在5％左右,但关于其临床意义鲜见报道,鉴于目前国内尚未见关于JAK2V617F突变研究的文献报道,我们通过建立可行的等位基因特异性PCR(AS-PCK)检测技术,对160例MDS患者骨髓或外周血标本进行了JAK2V617F基因突变分析,并初步探讨了与MDS分型、临床特征及与MDS疾病进展的关系。
　　 2009年国外相继报道,在MDS患者中发现目前为止突变最频繁的基因异常一TET2基因,有报道突变率达22.9％,国内尚未见相关报道,我们通过AS-PCR扩增产物后测序的方法,分别检测了24例MDS患者TET2基因的11个外显子,并对TET2基因突变与MDS临床特征之间的相关性及预后意义进行了初步分析。
　　 方法:
　　 第一部分:通过建立等位基因特异性PCR方法,研究160例MDS患者的JAK2V617F突变发生情况。160例MDS患者均为我院2006年5月至2009年5月我院门诊及住院患者。按照2001年世界卫生组织(WHO)分型诊断标准,RA型69例,RAS型8例,RCMD型8例,RAEB-1型22例,RAEB-2型28例,MDS-U型20例,5q-综合征4例。20名正常对照为我院体检正常者。
　　 主要研究方法为:
　　 (1)采集患者骨髓或外周血2ml,Ficoll-paque分离单个核细胞,运用基因组DNA抽提试剂盒进行DNA的抽提；
　　 (2)采用等位基因特异性PCR技术(AS-PCR)扩增JAK2基因,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,筛选出突变阳性患者PCR产物进行测序证实。
　　 (3)通过统计学分析JAK2突变与部分临床参数间的相关性。
　　 第二部分:通过AS-PCR扩增产物后测序的方法；检测24例MDS患者TET2基因的11个外显子中的突变发生情况。24例MDS患者均为我院2006年5月至2009年5月我院门诊及住院患者。按照2001年世界卫生组织(WHO)分型诊断标准,RA型7例,RAS型5例,RAEB-1型5例,RAEB-2型5例,MDS-U型2例。10名正常对照为我院体检正常者。
　　 主要研究方法为:
　　 (1)运用基因组DNA抽提试剂盒进行DNA的抽提部分同第一部分；
　　 (2)采用等位基因特异性PCR技术(AS-PCR)扩增TET2基因,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,所有出现目的条带患者PCR产物进行测序,对比正常TET2基因从而发现突变异常。
　　 结果:
　　 1.160例MDS患者中JAK2V617F突变型8例,该突变在中国MDS患者中的发生率为5％。20例正常对照无一例突变阳性。
　　 2.经过1-36个月的动态随访发现,160例MDS患者中发生急性白血病转化者12例(17.1％),中位转化时间为3(1～13)月,其中M26例(50％),M42例(16.7％),Ms2例(16.7％),M62例(16.7％)。JAK2基因突变型患者转化率为37.5％(3/8)高于野生型的5.9％(9/152),差异有统计学意义(P=0.004)。
　　 3.24例MDS患者中检测到2例17ET2突变,该突变在中国MDS患者中的发生率为8.3％。标本03号在第3号外显子出现第273位氨基酸上缺失C突变,标本18号在第7号外显子出现第1298位氨基酸上G-C突变。10例正常对照无一例突变阳性。
　　 4.2例TET2基因突变型与22例野生型之间在一般临床特征上差异无统计学意义,但1例突变在MDS进展至M4后TET2基因检测仍发现同一突变,因标本例数较少,尚不能分析此突变与MDS预后之间的关系。
　　 结论：
　　 1.中国MDS患者中JAK2V617F突变发生率为5％,与国外相关报道结论一致。
　　 2.8例突变型患者中RAEB-2型3例(37.5％),RAEB-1型2例(25％),MDS-U型2例(25％),RCMD型1例(12.5％)。MDS各亚型间JAK2V617F突变差异无统计学意义,在一般临床特征上差异无统计学意义,但突变型的AL转化率高于野生型,JAK2V617F突变与MDS继发AL有一定相关性。
　　 3.中国MDS患者中TET2突变发生率为8.3％,低于国外相关报道,该结论有待于扩大样本量进一步验证。
　　 4.MDS患者中TET2突变均为单一改变,其中一例突变提示TET2突变在MDS疾病进展中相对稳定,可能与MDS继发性AL无明显相关性。但与MDS疾病的预后相关性有待扩大样本进一步研究。