CD40L对人结肠癌细胞HCT-116生长抑制作用及其机制的实验研究

摘要

目的：研究CD40L对体外培养的人结肠癌HCT-116细胞株增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机制。
　　 方法：采用不同浓度（0.1ug/ml、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、3.0μg/ml）的CD40L处理处于对数生长期的结肠癌HCT-116细胞，倒置显微镜观察细胞生长情况，MTT比色法测定计算各实验组和对照组细胞的生长抑制率，流式细胞术（FCM）检测CD40L对HCT-116细胞周期和细胞凋亡的影响，RT-PCR.半定量法检测VEGF、bcl-2及fasmRNA的表达水平，Western Blot法测定肿瘤细胞中细胞内VEGF、Bcl-2及Fas蛋白的表达情况。
　　 结果：（1）MTT法显示一定浓度的CD40L可抑制HCT-116细胞增殖，抑制作用呈时间和剂量依赖性，实验组与对照组及各实验组之间比较均有统计学意义（p<0.05）。（2）FCM结果显示，HCT-116经CD40L作用48小时后，细胞有明显凋亡，且随浓度的增加和作用时间延长而增强，G2/M期细胞比例上升，G0/G1期细胞比例下降，呈剂量依赖性（p<0.05）。（3）RT-PCR法显示，HCT-116细胞的fas mRNA随CD40L浓度增加而表达增加，VEGF、bcl-2 mRNA随药物浓度增加表达下降（p<0.05）。（4）Western Blot法结果显示，随着不同浓度的CD40L处理48h后，HCT-116细胞中VEGF、Bcl-2蛋白表达下降，Fas蛋白表达升高（p<0.05）。
　　 结论：（1）CD40L可以抑制体外培养的人结肠癌HCT-116细胞生长，具有时间和剂量依赖性，将细胞周期阻滞于G2/M期，诱导细胞凋亡。（2）CD40L对HCT-116细胞生长抑制和诱导凋亡作用可能与上调Fas基因转录和蛋白表达，下调VEGF、Bcl-2基因转录和蛋白表达有关。