逆转录环介导等温扩增检测风疹病毒RNA方法的建立和应用

摘要

目的：建立一种灵敏度高、特异性强、简单快速、低成本检测风疹病毒RNA的方法。
　　 方法：选取保守基因E1设计引物，采用逆转录环介导等温扩增(ReverseTranscription-Loop-Mediate Isothermal Amplification，RT-IAMP)技术建立了检测风疹病毒RNA的方法，优化RT-LAMP反应体系，并进行特异性、敏感性评估，在此基础上建立依据SYBR Green I显色反应直接判断结果的简便方法。为验证我们建立方法的临床应用价值，最后用建立的方法对103例孕妇血清标本进行检测，并与RT-PCR及ELISA相比较。
　　 结果：通过对建立的RT-LAMP扩增风疹病毒RNA反应体系的优化，发现镁离子对RT-LAMP影响较大，其它如甜菜碱、温度等影响不是很大。特异性评估表明仅风疹病毒检测阳性，而双蒸水、人类基因组RNA、丙型肝炎病毒RNA检测均为阴性，酶切鉴定结果进一步证明了扩增的特异性。检测下限约为每反应管10拷贝。103例孕妇血清标本经RT-PCR、RT-LAMP和ELISA检测，分别检出14例、15例和7例。
　　 结论：本研究中建立的RT-LAMP检测风疹病毒RNA的方法，特异性强、敏感性高、简便快速且成本低，有望在临床检测中发挥一定的作用。