P188对脑外伤引起的脑水肿及AQP1、AQP4表达的影响

摘要

目的：研究脑外伤后脑组织含水量(cerebralwatercontent，CWC)的变化规律及细胞质膜修复剂泊洛沙姆188(poloxamer188，P188)对脑外伤后脑组织含水量变化的影响，并对其调节机制进行初步探讨。
　　 方法：采用改良的自由落体装置建立小鼠定量脑外伤（traumaticbraininjury，TBI）模型。(1)按TBI后时间不同分为TBI后1h、3h、6h、24h、48h、72h和168h组，小鼠处死后立即开颅取脑，去掉嗅球和小脑后，取大脑损伤侧和损伤对侧的脑组织测定CWC百分比，研究TBI后CWC的变化规律。(2)P188通过尾静脉在TBI前30min给药，并按P188不同浓度分为2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml和16mg/ml组，TBI后24h断头取损伤侧脑组织测定CWC百分比，研究不同浓度P188对TBI后CWC的影响。(3)P188(4mg/ml)通过尾静脉在TBI后给药，并按TBI后给药时间不同分为TBI后15min、30min、1h、2h和4h给药组，并在TBI后24h断头取损伤侧脑组织测定CWC百分比，研究P188不同时间点给药对TBI后CWC的影响。(4)TBI前30min分别尾静脉注射P188(0.1ml,4mg/ml)或等体积生理盐水，TBI假损伤组仅右顶部开骨窗，不致脑外伤，同时设立空白对照组，各组按TBI后时间不同分为TBI后1h、3h、6h、24h和48h组，按时间点处死后取损伤侧脑组织测定CWC百分比，研究P188对TBI后CWC变化规律的影响。(5)为了探讨P188对TBI后CWC影响的作用机制，运用伊文氏蓝(evansblue，EB)测量血脑屏障(blood-brainbarrier,BBB)通透性，RT-PCR、Westemblot检测TBI后水肿相关蛋白AQP4、AQP1表达变化，同时应用免疫荧光对AQP4在脑组织中的表达进行定位。
　　 结果：(1)TBI后引起的脑水肿开始于6h，24h达高峰。(2)P188(0.1ml,4mg/ml)TBI前30min和TBI后30min内给药能有效降低BBB通透性，减轻TBI后脑水肿。(3)TBI后AQP4mRNA、蛋白表达量均在早期升高，晚期降低；在TBI后24h与48h时间点，P188预防性给药能显著地抑制TBI引起的AQP4的激活(P＜0.05)，而对AQP1表达没有明显影响；AQP4与星形胶质细胞的标志物GFAP及毛细血管内皮细胞标记物Vwf有共定位，但与神经元的标志物β-Tubulin没有共定位。
　　 结论：TBI后发生脑水肿，脑水肿的高峰期发生在TBI后24h；P188可能是通过修复BBB及神经细胞质膜而减轻TBI引起的血管源性脑水肿和细胞毒性脑水肿，同时可以抑制TBI引起的AQP4表达，而对AQP1表达无影响。修复受损的细胞质膜可作为治疗脑外伤的新靶点。

目录

声明

前言

第一部分 P188对小鼠TBI后脑水肿变化影响的研究

第一节 TBI后脑水肿的时程变化规律

第二节 P188不同浓度对TBI后脑水肿的影响

第三节 P188不同给药时间对TBI后脑水肿的影响

第四节 P188对TBI后不同时间点脑水肿的影响

第五节 P188对TBI后BBB通透性的影响

第二部分 P188对小鼠TBI后损伤侧脑组织AQP1、AQP4表达的影响

第一节 P188对TBI后损伤侧脑组织AQPI-、AQP4-mRNA表达的影响

第二节 P188对TBI后损伤侧脑组织中AQP4蛋白表达的影响

第三节 AQP4免疫荧光细胞定位

讨论

结论

参考文献

展望(不足与待改进之处)

综述

本课题资助项目

缩略词

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢