组织激肽释放酶8在宫内生长受限大鼠海马中的表达及其意义

摘要

目的：用孕期全程低蛋白(6％)饮食法制造宫内生长受限(Intrauterine growth retardation，IUGR)仔鼠脑损伤模型，观察组织激肽释放酶8(Neuropsin，KLK8)在海马中的表达变化，检测仔鼠学习记忆能力，探讨IUGR发生脑损伤的机制。
　　 方法：选取健康三月龄Sprague-Dawley大鼠28只，按照雌雄1∶1的比例置于同一笼中交配。受孕成功的孕鼠随机分为对照组和IUGR组。对照组母鼠自受孕后第一天开始给予21%正常蛋白饮食，而IUGR组母鼠自受孕后第一天开始给予6%低蛋白饮食，建立IUGR仔鼠模型。两组仔鼠生后至21日的哺乳期内，均给予母鼠21%正常蛋白饮食喂养、自由饮水。21日后将母鼠与仔鼠分笼，给予两组仔鼠21%正常蛋白饮食喂养、自由饮水，喂养至32日。选择1日、5日、10日和21日作为观察的4个时间点，每个时间点每组有6只仔鼠，测量仔鼠体重、头臀长、脑湿重，并对各个时间点仔鼠留取海马组织，HE染色观察1日及21日海马结构的变化，用Western blot检测海马组织中组织激肽释放酶8的表达，于26日至32日行Morris水迷宫测试，检测仔鼠学习记忆能力。
　　 结果：1、两组仔鼠体格生长及脑重的动态比较：与对照组相比，1日龄IUGR仔鼠形态瘦小，体重、头臀长及脑湿重均降低(P＜0.05)；5日龄及10日龄时体重、头臀长及脑湿重仍落后(P＜0.05)；经追赶生长，到21日龄时，体重、头臀长无明显差异(P＞0.05)，脑湿重仍低(P＜0.05)。
　　 2、两组仔鼠海马HE染色的变化：与对照组相比，1日龄时IUGR仔鼠海马神经元细胞排列疏松、紊乱，细胞数目减少；部分细胞水肿明显，出现空泡；核固缩细胞比较多，出现凋亡细胞。21日龄时IUGR组神经元细胞水肿基本消失，但细胞排列仍相对疏松、紊乱，细胞数目未见明显增多。
　　 3、两组仔鼠海马中组织激肽释放酶8的表达：在四个时间点，1日龄时两组仔鼠组织激肽释放酶8的表达低,5日龄时两组仔鼠组织激肽释放酶8的表达增加，10日龄和21日龄时两组仔鼠组织激肽释放酶8的表达急剧增加；与对照组相比，在四个时间点，IUGR仔鼠组织激肽释放酶8的表达均低于对照组(P＜0.05)。
　　 4、Morris水迷宫实验显示：(1)两组仔鼠逃避潜伏期于测试第1天至第5天逐渐缩短；第5天IUGR组逃避潜伏期明显长于对照组，具有统计学意义(P＜0.05)。(2)搜寻策略结果：第5天时，IUGR组和对照组成绩比较有差异，具有统计学意义(P＜0.05)。(3)两组穿越平台次数无明显差异(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 1、用6%低蛋白饮食法能建立IUGR大鼠脑损伤模型。
　　 2、IUGR仔鼠体态瘦小，脑重低，海马神经元细胞数目少。给予IUGR仔鼠正常喂养，体格上可实现追赶生长，但脑重、神经元数目仍落后于正常仔鼠，并且出现学习能力的降低。
　　 3、IUGR仔鼠组织激肽释放酶8在海马中的表达量一直低于正常组仔鼠，组织敷肽释放酶8表达的下降可能是IUGR发生脑损伤的机制之一。

目录

声明

前言

材料和方法

1 实验材料:

2 主要方法

3 结果统计学分析:

结果

1 动物模型的大体观察

2 两组大鼠海马HE染色

3 用Western blot法测海马中组织激肽释放酶8的表达

4 学习记忆能力的测试

讨论

1.低蛋白宫内生长受限脑损伤模型的建立

2.宫内生长受限的大鼠生长的规律性、脑重及脑结构改变

3.宫内生长受限大鼠神经功能的变化

4.宫内生长受限大鼠海马中组织激肽释放酶8的表达变化

结论

参考文献

综述

中英文对照缩略词表

攻读学位期间发表的论文

致谢