泥鳅冻干粉保肝及抗肝纤维化实验研究

摘要

目的：研究泥鳅冻干粉( Misgurnus anguillicaudatus Cantor lyophilized powder，简称MLP)的保肝及抗肝纤维化作用，并探讨其作用机制。
　　方法：(1)采用急性毒性试验确定MLP的LD50或最大给药量。给予MLP最大浓度剂量12.48g/kg，连续观察7d，记录小鼠体重及毒性反应情况。(2)筛选泥鳅不同部位冻干粉对小鼠CCl4肝损伤的保护作用。分别给予泥鳅全粉、泥鳅肌肉粉和泥鳅皮冻干粉，给药剂量100mg/kg，连续10d，第11d时，ip0.4﹪的CCl4油溶液。眼眶取血，制备血清，测血清中ALT、AST含量。(3)建立小鼠CCl4急性肝损伤模型，分别给予不同剂量MLP（100、200、400 mg/kg），制备血清，测血清中ALT、AST含量。(4)建立小鼠CCl4肝纤维化模型，分别给予不同剂量MLP(50、100、200 mg/kg)。测血清中ALT、AST含量及组织中Hyp含量，并通过病理切片HE染色和Masson染色观察组织病理改变。(5)建立大鼠DMN肝纤维化模型，分别给予不同剂量MLP(50、100、200mg/kg)，扶正化瘀胶囊为阳性药，测定指标同小鼠肝纤维化模型。(6)在抗肝纤维化实验基础上，深入研究其作用机制，采用ELISA方法检测MMPs、TIMP-1，HA、LN及胶原PC-III、C-IV、TGF-β1含量，Western Blot方法检测组织中α-SMA、TIMP-1蛋白含量，免疫组化法检测α-SMA、TIMP-1的蛋白表达及分布情况。
　　结果：(1) MLP最大给药浓度时，无中毒症状及死亡，提示MLP在12.48g/kg浓度内是安全的。(2)泥鳅不同部位冻干粉保肝作用筛选结果，泥鳅肌肉粉和泥鳅全粉给药均能显著降低血清中ALT、AST水平( P＜0.05)，泥鳅皮无明显效果。由于泥鳅肌肉粉和泥鳅全粉给药的作用无明显差异，考虑到制作工艺，选择泥鳅全粉作为实验药物。(3)MLP对小鼠CCl4急肝损伤的保护作用中，与模型组相比，MLP能显著下调血清中ALT、AST水平(P＜0.05)，尤其高剂量组(P＜0.01)。(4)在小鼠CCl4肝纤维化模型中，MLP能降低组织中Hyp含量(P＜0.05)。病理组织切片观察到肝纤维化模型组中肝小叶结构破坏，肝细胞呈气球样变性、羽毛样变性，汇管区有大量炎症细胞浸润。胶原纤维构成纤维间隔，完整的假小叶形成。MLP三个剂量组中肝小叶结构基本正常，肝细胞肿大，有变性，程度均轻于模型组。尤其高剂量组，炎症细胞少见，胶原纤维少。同时肝纤维化SSS评分较治疗前下降＞2分，提示MLP能显著减轻肝纤维化程度。(5)抗DMN大鼠肝纤维化实验中，MLP能显著降低血清中ALT、AST水平(P＜0.05)和组织中Hyp含量(P＜0.05)，升高血清中白蛋白Alb含量(P＜0.05)。病理切片观察MLP给药后肝细胞基本正常，炎症细胞少见，胶原纤维明显减少。(6)ELISA结果显示MLP能下调HA、LN水平以及PC-III、C-IV含量，减少胶原合成；同时MMP-2水平下降，MMP-9水平升高，增加胶原降解；细胞因子TGF-β1表达降低。Western及免疫组化结果显示TIMP-1、α-SMA蛋白表达减少。
　　结论：MLP有显著的保肝及抗肝纤维化作用，其抗肝纤维化机制可能与减少ECM合成、促进ECM降解，抑制HSC活化，抑制细胞因子TGF-β1表达有关。

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引 言

第一章 泥鳅冻干粉急性毒性实验

1 材料与方法

2 结果

第二章 泥鳅冻干粉保肝及抗肝纤维化作用研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 小结与讨论

第三章 泥鳅冻干粉抗肝纤维化机制研究

1 材料

2方法

3 结果

4 小结与讨论

结 论

参考文献

综 述

英文缩略词表

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