C646联合腰果酸对雄激素非依赖性前列腺癌细胞抑制作用的实验研究

摘要

工作目的：
　　观察组蛋白乙酰转移酶抑制剂C646分子联合腰果酸（Anacardic acid,AA）对雄激素非依赖性前列癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期、迁移能力的影响，并探讨其机制。
　　研究方法：
　　先采用MTS检测方法观察两种药物分别作用于各种前列腺癌细胞株及正常前列腺细胞后的毒性反应，筛选出毒性相对较大的雄激素非依赖性前列腺癌细胞株继续进行分组实验，通过MTS、Trans-well实验、流式细胞仪、倒置显微镜直接观察等进行细胞毒性检测、增殖检测、迁移能力检测、凋亡检测及细胞周期的检测。并结合已有研究对其可能的作用机制进行分析。
　　结果：
　　MTS检测发现两种药物对四种细胞株的毒性效应相似,均表现为LNCaP>DU-145>PC-3>PNT1A，我们选择DU-145进行进一步实验，C646组对DU-145细胞株的毒性较为明显，半抑制浓度约为20μmol/L，AA组的毒性作用相对较弱，半抑制浓度约为75μmol/L，但对正常前列腺细胞影响较大，当小于25μmol/L时对正常细胞影响较小,后面的实验所用的就是这个浓度。C646组、AA组及联合用药组药物分别作用于DU-145细胞后，（1）MTS检测发现细胞存活率分别为0.529、0.763、0.239，联合用药组毒性作用明显增强（P<0.05）；（2）流式细胞仪检测细胞凋亡及 Western Blot分析凋亡标记物结果均显示联合用药组凋亡诱导能力较各单独用药组大大增强（P<0.05）；（3）Trans-well实验发现迁移细胞占对照组比例分别为77.82%、88.35%、65.19%，联合用药组作用最为明显（P<0.05）；（4）PI单染流式细胞仪检测发现各组药物对细胞周期的影响均无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　C646及腰果酸单用时均能有效抑制前列腺癌细胞系DU145的增殖，并促进其凋亡，两药联用时效果最明显；两种药物对细胞迁移也有一定影响，联用时抑制效果最佳；两种药物对细胞周期无明显影响。

目录

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英文摘要

目录

序言

实验材料

第一节 主要器材和设备

第二节 主要试剂

第三节 主要试剂配制

第四节 细胞株

实验方法

第一节 细胞培养及传代

第二节 MTS法检测化合物对前列腺癌细胞增殖的影响

第三节 凋亡细胞的镜下观察

第四节 流式细胞仪-Annexin V/PI双染检测细胞凋亡

第五节 蛋白免疫印迹-Western blot检测凋亡相关蛋白

第六节 Transwell法检测药物对DU145细胞纵向迁移能力的影响1、目的与原理

第七节 流式细胞仪进行细胞周期检测

第八节 统计学分析

实验结果

第一节 MTS比色法细胞毒性检测结果

第二节 两种药物细胞毒性作用的镜下表现

第三节 流式细胞仪细胞凋亡的检测结果

第四节 蛋白免疫印迹法对凋亡相关蛋白的检测结果

第五节 Transwell法细胞迁移能力检测结果

第六节 药物对细胞周期影响的检测结果

讨论

结论

参考文献

硕士研究生期间发表论文

附录

英文缩略词表

致谢