奥沙利铂联合五氟尿嘧啶术前短程冲击化疗对大肠癌组织survivin基因表达的影响

摘要

【及目的】
　　大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,对人类生命有极大的危害。近年来,随着国内膳食结构的改变等原因,大肠癌的发病率和死亡率显著上升。其发病率约排在恶性肿瘤的第三位,且具有年轻化方向的趋势。大约有30％-50％的患者会发生转移性复发,并成为导致患者死亡的主要原因。
　　手术是大肠癌最重要的治疗手段,但进展期大肠癌的复发率仍然很高。近年来,新辅助化疗作为综合治疗的一种方法在大肠癌中的应用已得到越来越多的关注。新辅助化疗是指在施行手术或放疗之前应用的全身性化疗,其目的是:①使原发肿瘤或转移病灶缩小,降低肿瘤分期,使不能切除的肿瘤变成可以切除,提高根治性手术的切除率,降低肿瘤复发率;②控制术前存在的微小癌及亚临床病灶,抑制由于手术作用引发的肿瘤增殖刺激,控制医源性转移;③在损伤肿瘤病灶的血管供应及淋巴管之前进行化疗,使化疗药物容易在肿瘤局部达到有效浓度,起到高剂量杀伤作用;④为术后判定或选择抗癌药物提供依据,有助于术后化疗方案的选择,并可协助评价预后,防止远处转移。尽管目前临床上缺乏随机对照研究的资料肯定其疗效,但结直肠癌病人术前新辅助化疗的应用已经越来越普遍。
　　但是,术前新辅助化疗并非没有缺点。化疗药物的毒副作用可能会影响将患者机体术前调节到最佳状况的准备;大剂量多疗程的辅助化疗甚至使有些患者由于骨髓抑制不得不延期手术;对化疗不敏感的肿瘤患者来说,存在延误治疗、使病期进展的风险。Li等在96例直肠癌术前新辅助化疗病人中,进行术后伤口愈合的系列研究,结果发现:新辅助化疗组病人切口愈合延缓的发生率为32.3％,明显高于对照组的15.8％;术后切口感染的发生率化疗组病人为21.9％,也明显高于对照组的12.6％。所以,目前对于术前新辅助化疗的方案及疗程尚未有统一的意见。
　　术前短程化疗可以减少大剂量化疗对手术的影响,同时不会延误有不全性梗阻或缓慢出血的结直肠肿瘤病人的手术治疗时间,提高手术安全性。刘伟平等研究报告,术前短程冲击化疗后行根治性手术治疗,术后化疗组疗效明显高于对照组,并且毒副反应少,结束一个疗程的术前短程冲击化疗后均能行正常手术。
　　奥沙利铂作为第三代铂类药物,抗癌活性强,与5-Fu有协同作用,对多种肿瘤有效,毒副作用低,已经广泛的应用。近期有学者研究表明奥沙利铂化疗能够通过改变 p38有丝分裂原激活蛋白(Mitogen-activating protein,MAP)和蛋白酶体(proteasome)来降低结肠癌细胞中调亡抑制基因(survivin)的活性,诱导肿瘤细胞凋亡。
　　Survivin是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis,IAP)家族的新成员,是目前发现最强的凋亡抑制因子。Survivin功能复杂,具有抑制细胞凋亡,促进细胞转化并且参与细胞的有丝分裂、血管的生成和肿瘤细胞耐药性的产生等作用。Sohn等在HCT116人结肠癌细胞中发现奥沙利铂能有效抑制肿瘤细胞浆中Survivin的表达。
　　本研究通过对大肠癌患者术前奥沙利铂联合五氟尿嘧啶短程冲击化疗后,对手术切除的肿瘤组织进行检测调亡抑制基因Survivin的表达,进一步评估术前短程辅助化疗对大肠癌患者的治疗价值。
　　【实验方法】
　　对99例结直肠患者随机分为两组。实验组50例,进行术前奥沙利铂联合五氟尿嘧啶短程冲击化疗,三日后手术。对照组49例,常规术前准备后手术。
　　1.观察和记录两组病人的一般资料,包括性别、年龄和体重。入院后、手术前和手术后抽外周血检查全血和肝、肾功能。严密观察和记录术后的不良反应,进行对比分析。
　　2.免疫组化技术检测结直肠癌肿瘤组织中的survivin的强度。
　　手术切除的肿瘤组织标本根据制造商的推荐应用辣根过氧化物酶技术(horseradish-peroxidase technique)进行survivin免疫组化染色。
　　3.应用RT-PCR技术检测结直肠癌肿瘤组织中的survivin mRNA的表达量。
　　应用 RT-PCR技术检测手术切除的肿瘤组织标本的survivin mRNA的表达量。连续收集荧光信号,用 Sequence Detection SoftwareV1.2分析软件获取Ct值。根据Ct值和标准品浓度绘制标准曲线,计算扩增效率,计算Survivin mRNA的相对定量数。
　　4.统计学分析
　　釆用SARS6.12统计软件进行数据处理,所有变量均用x±s描述,组间均数比较采用成组设计的t检验进行数据分析,计数资料的比较采用x2检验。
　　【实验结果】
　　一、术前奥沙利铂联合五氟尿嘧啶短程冲击化疗对手术的不良影响
　　实验组病人术后的不良反应,包括腹腔感染、吻合口瘘、腹泻、肠梗阻、肺部感染、尿路感染、切口感染等发生率,与对照组相似(P>0.05),均无统计意义,表明术前奥沙利铂联合五氟尿嘧啶短程冲击化疗是安全的,不会对手术造成明显影响。
　　二、应用免疫组化技术检测结直肠癌肿瘤组织中的survivin基因表达的强度
　　实验组和对照组肿瘤标本的survivin免疫组化的表达率分别为88.0％和95.90％,在两组间的差异有显著性(P<0.05)。在有淋巴结转移病例中,survivin的表达率在新辅助化疗实验组低于手术对照组,差异有显著意义(P<0.05)。
　　三、应用 RT-PCR技术检测结直肠癌肿瘤组织中的survivin mRNA的表达量
　　实验组survivin mRNA表达平均水平为18.1356±16.3216,明显低于照组的平均水平32.3904±18.6915,有显著差异(P=0.0041)。
　　【结论】
　　1.术前奥沙利铂联合五氟尿嘧啶短程冲击化疗后结直肠癌肿瘤组织的survivin基因表达比单纯手术组的表达低。
　　2.术前奥沙利铂联合五氟尿嘧啶短程冲击化疗可以诱使结直肠癌肿瘤组织细胞凋亡。
　　3.术前奥沙利铂联合五氟尿嘧啶短程冲击化疗对手术是安全的,不会引起术后短期内不良反应。

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引言

材 料 与 方 法

1. 临床资料

2. 分组

3. 临床观察指标

4. 实验材料

5. 实验方法

结果

1. 试验组和对照组的临床病理资料比较

2. 试验组和对照组术后并发不良反应发生率的比较：

3. 试验组和对照组手术前、后实验室检查结果比较

4. 试验组和对照组结直肠癌组织survivin免疫组化染色比较

5. 试验组和对照组结直肠癌组织survivin mRNA表达比较

讨论

结论

参考文献

大肠癌术前新辅助化疗的研究进展

攻读学位期间发表论文

致谢