不同剂量中波紫外线对角质形成细胞NF-κBp65及其抑制因子IκBα表达的影响研究

摘要

目的：探讨不同剂量中波紫外线照射对体外培养的人皮肤角质形成细胞总蛋白中的NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达水平的调控效应。
　　方法：使用4.5mJ/cm2、10 mJ/cm2及50 mJ/cm2中波紫外线照射角质形成细胞,设置未经照射的对照组,在照射后的第4小时使用蛋白免疫印迹法测定细胞总蛋白中IκBα及NF-κB p65的表达水平。并对人原代角质形成细胞进行50mJ/cm2中波紫外线照射,照射后继续培养至第2、4、8、12小时,分别测定四个时间点IκBα及NF-κB p65的表达水平。
　　结果：4.5mJ/cm2和10 mJ/cm2UVB照射后4h,相对于对照组细胞,细胞系及原代细胞总蛋白中IKKβ、IκBα、NF-κB p65表达水平均无明显变化(P>0.05);50mJ/cm2UVB照射后4h,细胞系及原代细胞中IKKβ的表达水平均无明显变化(P>0.05),原代角质形成细胞中,IκBα表达水平较对照细胞(0.356±0.041)显著降低(0.128±0.031,t=43.879,P<0.05),NF-κB p65较对照细胞(0.102±0.028)也较存在一定程度的降低(0.063±0.032, t=16.887,P<0.05),细胞系中IκBα的表达水平较对照细胞(0.289±0.037)轻度下调(0.123±0.031,t=31.074,P<0.05),NF-κB p65的表达水平无明显变化(P>0.05)。50mJ/cm2UVB照射原代细胞后,相对于对照组细胞(0.208±0.031),IκBα表达水平在照射后2h开始下调(0.140±0.034, t=17.554,P<0.05),并且随照射后时间推进而下调效应更为显著;NF-κB p65的表达水平在2h和4h时无明显变化(P>0.05),8h时较对照细胞(1.235±0.349)表达水平下调(1.162±0.345,t=36.671,P<0.05),12h较对照细胞(1.390±0.226)仍下调(1.061±0.246,t=28.707,P<0.05),随着时间的推进下调效应无明显改变;Phospho-IKKα/β(ser176/180)、IKKβ、Phospho-IKBα(ser32)、Phospho-NF-κB p65(ser536)表达量均无明显改变(P>0.05)。
　　结论：高剂量(50 mJ/cm2)中波紫外线辐射可显著抑制人原代角质形成细胞总蛋白中的IκBα表达,同时轻度抑制NF-κBp65蛋白的表达,提示可能存在中波紫外线辐射人原代角质形成细胞引起NF-κBp65活化的另一种通路。

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引言

材料与方法

一、实验材料

1、主要仪器和材料

2、主要试剂

3、抗体

4、试剂配制

二、实验方法

（一）细胞培养

（二）UVB辐射

（三）免疫印迹（Western Blotting）

四、统计学分析

结果

一、不同剂量UVB照射对角质形成细胞IKKβ、IκBα和NF-κB p65表达的影响

二、50mJ/cm2UVB 照射后不同时间点原代角质形成细胞 IKKβ、IκBα 、 NF-κBp65 及 相 关 Phospho-IKKα/β 、 Phospho-IκBα 、Phospho-NF-κB p65表达水平变化

讨论

结论

参考文献

综述

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攻读学位期间公开发表的论文

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