大肠癌相关成纤维细胞的放射效应与大肠癌细胞相互影响的研究

摘要

目的：初步研究肿瘤细胞对大肠癌相关成纤维细胞（CCAFs）放射效应的影响，以及辐照后大肠癌相关成纤维细胞对大肠癌细胞的影响。
　　方法：采用组织块培养法，将组织块周爬出的成纤维细胞消化，培养至3-4代，免疫荧光鉴定后，与大肠癌细胞共培养并分四组，依次为①非共培养0Gy组②共培养0Gy组③共培养4Gy组④非共培养4Gy组，处理各组后，检测CCAFs的生长、凋亡、自噬以及衰老等放射反应。
　　收集CCL-244/CCAFs共培养（CCAFs组）以及CCL-224/辐照CCAFs共培养（RCCAFs组）条件培养基，并以无血清培养基培养的CCL-224细胞作为空白组，检测各组肿瘤细胞CCL-244的克隆、增殖、生长、迁移能力。
　　结果： CCAFs和CNFs都表达成纤维细胞标志物Vimentin；CCAFs表现为α—SMA表达阳性，而CNFs几乎不表达α—SMA；无论共培养与否，辐照组CCAFs的生长活力（OD值）均小于非辐照组（P<0.05），而进行4Gy辐照后，共培养4Gy组与非共培养4Gy组的生长活力在第2、4天无明显差别(P>0.05),但在第6天时，两者OD值出现统计学差异，表现为共培养4Gy组的OD值高于非共培养4Gy组，未辐照的CCAFs的生长活力（OD值）是逐渐增加的，而接受辐射后，无论在共培养组还是非共培养组与否，CCAFs的生长活力（OD值）几乎没有变化；与大肠癌细胞（HCT及CCL）共培养的CCAFs，经4Gy辐照后，凋亡率明显增加（P<0.01），非培养4Gy组CCAFs的凋亡率高于与共培养4Gy组（P<0.01）；非共培养4Gy组CCAFs经过辐照后，出现明显的染色反应，细胞数目变少，但细胞体积变大，衰老染色深，而在与大肠癌细胞共培养的CCAFs经过4Gy辐照，亦出现染色反应，但染色细胞数量少，相对染色较浅(p<0.01)，且未出现明显的细胞形态学改变；通过对自噬相关蛋白Atg-5、Atg-7和Beclin-1表达的Western blot检测，可见经4Gy辐照后，各组CCAFs的自噬有关蛋白表达增加，辐照后，非共培养4Gy组的CAFs的自噬水平明显高于共培养组。
　　RCCAFs组的肿瘤细胞克隆增殖比为0.6589±0.009493，高于CCAFs组（0.6378±0.01365），但差异无统计学意义(P>0.05),两组均明显高于空白组(0.5200±0.006939)，差异具有统计学意义(P<0.01)； RCCAFs组反应肿瘤细胞生长能力的吸光度值（OD值）在第3天和第5天分别为0.3502±0.1278和0.6571±0.1351，CCAFs组分别为0.3234±0.00986和0.7116±0.1259,均明显高于空白组（0.2258±0.00536）和（0.4608±0.1382），差距具有统计学意义(P<0.01)，但在第3天RCCAFs组的OD值高于CCAFs组差别无统计学意义(P>0.05)，第5天RCCAFs组的OD值低于CCAFs组差别有统计学意义(P=0.007)；RCCAFs组肿瘤细胞增殖指数（PI）为0.4203±0.01308，低于CCAFs组（0.4491±0.01916），差异无统计学意义(P>0.05),两组均明显高于空白组(0.3381±0.02580)，差异具有统计学意义(P<0.05)；RCCAFs组的迁移率在48h为(39.33±3.80)％，CCAFs组为（40.12±4.04）%，两组间差异无统计学意义(P>0.05)；均高于空白组（21.13±2.89）%，差异有统计学意义(P<0.01)。
　　结论： CCAFs对辐射并不具有超强耐受力，4Gy单次辐照即可对CCAFs产生生长抑制、凋亡增加、明显衰老和自噬等效应；大肠癌细胞对CCAFs具有一定放射保护作用。
　　4Gy单次辐射并未影响CCAFs对大肠癌CCL-224促生长、增殖与迁移能力。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

第一部分 肿瘤细胞对大肠癌相关成纤维细胞（CCAFs）放射效应的影响

前言

一、材 料

二、方 法

三、结 果

四、讨 论

五、结 论

参考文献

第二部分 辐照后大肠癌相关成纤维细胞对大肠癌细胞的影响

前言

一、材 料

二、方 法

三、结 果

四、讨 论

五、结 论

参考文献

综述:肿瘤相关成纤维细胞的放射效应及其对肿瘤的影响

英文缩略词表

攻读硕士期间论文与成果

致谢