胱抑素C对急性缺血性卒中的影响及对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

摘要

第一部分胱抑素C对急性缺血性卒中的影响
　　目的：观察急性缺血性卒中（acute ischemic stroke，AIS）患者血清胱抑素C(cyststin C, CysC)水平的变化，探讨血清CysC在AIS发病中的作用。
　　方法：收集自2012年11月至2014年12月在苏州大学附属第二医院神经内科住院的AIS患者601例作为病例组，选择同期住院的非AIS患者325例作为对照组，比较病例组与对照组的基本临床资料。运用logistic回归分析法研究血清CysC对AIS发病风险的影响；将病例组及对照组共926例患者按照血清CysC水平的区间范围分为5个亚组，比较不同亚组血清CysC对AIS发病风险的影响；对AIS患者进行美国国立卫生研究院卒中量表（National Institute of Health stroke scale, NIHSS）评分，运用斯皮尔曼等级相关法分析血清CysC与NIHSS评分的相关性；根据发病部位将AIS患者分为前循环组、后循环组及混合组，比较血清CysC与AIS发病部位的相关性。观察103例AIS患者治疗1周后的血清CysC水平，比较治疗前后血清CysC水平的变化。
　　结果：AIS患者的血清CysC水平为1.01±0.21mg/L，对照组的血清CysC水平为0.95±0.18mg/L，AIS患者的血清CysC水平显著高于对照组，两组比较，差异有统计学意义(t=-4.581,P<0.001)。logistic回归分析发现，在调整年龄、性别、高血压、糖尿病、肌酐、尿素、尿酸、甘油三脂、高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）、C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)等因素后，升高的血清CysC(OR9.80,95％CI3.12,30.83, P<0.001)是AIS发病的独立危险因素。所有研究对象以血清CysC水平划分成五个亚组，与第一个亚组相比，第二亚组(OR1.07,95%CI0.66-1.74, P>0.05)、第三亚组(OR1.09,95%CI0.67-1.78, P>0.05) AIS的发病风险无明显升高，第四亚组(OR1.92,95%CI1.08-3.40, P=0.026)、第五亚组(OR2.88,95%CI1.49-5.54, P=0.002) AIS的发病风险明显升高，且第五亚组的发病风险显著高于第四亚组。故异常升高的血清CysC是AIS发病的独立危险因素，且随血清CysC水平升高，AIS的发病风险增大。在AIS患者中，血清CysC与NIHSS评分无明显相关(P>0.05)，与梗死部位无明显相关(P>0.05)。与入院时的血清CysC相比(1.05±0.19 mg/L)，AIS患者通过1周治疗后血清CysC水平显著下降(0.99±0.18 mg/L)，差异有统计学意义(P<0.001)。
　　结论：AIS患者的血清CysC水平在急性期（3d）明显升高，经过1周治疗后显著下降。升高的血清CysC成为AIS发病的独立危险因素，且血清CysC超过正常值上限后，AIS的发病风险与血清CysC水平呈正相关。
　　第二部分胱抑素C对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用
　　目的：观察小鼠脑缺血再灌注损伤后内源性胱抑素C(Cystatin C，CysC)的变化情况；观察外源性CysC干预对小鼠脑缺血再灌注损伤是否具有神经保护作用。
　　方法：将雄性ICR小鼠随机分为假手术(sham)组、I/R（tMCAO）组和I/R+CysC组，建立小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO)模型，取缺血损伤侧脑组织作为标本，采用Western blot法测定缺血再灌注48h内脑组织中CysC的含量变化；采用免疫组化法比较假手术组和I/R组小鼠脑皮质中CysC的表达量。在缺血前30min侧脑室注射CysC，观察CysC(不同给药剂量)对tMCAO小鼠脑梗死体积及神经行为功能的影响。
　　结果：CysC含量在脑缺血再灌注损伤后6h显著升高，在24h达到顶峰，在48h呈下降趋势。与I/R组相比，CysC提前干预的tMCAO小鼠的脑梗死体积显著减小，神经行为功能明显改善（P<0.05）。通过对小鼠缺血再灌注损伤前30min侧脑室分别注射不同剂量CysC(25ng、50ng、100ng、200ng)，脑梗死体积在注射50ng时开始减小(P<0.05)，在注射100ng、200ng时减小更明显（P<0.05）。说明在一定浓度范围内，外源性CysC对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用具有药物剂量依赖性。
　　结论：小鼠脑组织中的CysC含量在脑缺血再灌注损伤早期(24h内)明显升高，在晚期(24h后)出现下降趋势。外源性CysC提前干预tMCAO小鼠后，小鼠的脑梗死体积显著减小，神经行为功能显著改善。这些均提示CysC对小鼠脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。

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引言

1.寻找急性缺血性卒中治疗药物的重要性

2.缺血性卒中及缺血再灌注损伤

3.血清胱抑素C(CysC)

4.本课题的特点及创新之处

第一部分：胱抑素C对急性缺血性卒中的影响

研究对象与方法

结果

小结

第二部分：胱抑素C对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

材料与方法

结果

小结

讨论

结论

参考文献

综述:血清胱抑素C与缺血性卒中相关性的研究进展

中英文缩略词表

附录：美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）

攻读学位期间公开发表的论文

致谢