土贝母苷甲诱导人神经胶质瘤U251细胞凋亡及其潜在机制的研究

摘要

目的：土贝母是我国一种传统的中草药，具有广泛的用途,土贝母苷甲（TBMS I）是从土贝母中分离纯化出的一种天然化合物。本实验以神经胶质瘤U251细胞为模型，初步探究土贝母苷甲在体外的抗胶质瘤作用及其潜在机制。
　　方法:我们运用MTT法检测不同浓度的TBMS I对神经胶质瘤细胞增殖的影响。通过倒置荧光显微镜来观察细胞核形态学的变化。运用流式细胞仪分析TBMS I对神经胶质瘤细胞凋亡的影响以及检测细胞内活性氧（ROS）的水平。实时荧光定量PCR技术检测miR-21以及PDCD4基因水平的变化。Western blot法分析相关蛋白表达水平的变化。
　　结果：TBMS I以剂量和时间依赖方式抑制神经胶质瘤U251细胞的增殖。TBMS I处理24h后，通过Hoechst33258染色法，我们观察到U251细胞出现了细胞核浓染、核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学改变。流式细胞仪检测显示，TBMS I以剂量依赖方式诱导神经胶质瘤 U251细胞凋亡。Western blot结果提示，TBMS I通过上调FADD、caspase-8、caspase-3、Bax的表达以及下调Bcl-2的表达诱导U251细胞凋亡。此外，我们还发现，TBMS I能够导致细胞中活性氧(ROS)生成增加，从而促进细胞色素 C（Cytochrome C）的释放以及 Caspase-3的活化，进而诱导神经胶质瘤 U251细胞凋亡。PCR结果显示, TBMS I作用于U251细胞后，miR-21的水平逐渐降低，而PDCD4基因的水平显著增加。Western blot结果也表明，随着TBMS I浓度的增加，PDCD4蛋白的表达水平显著上调。
　　结论：TBMS I能够显著抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。我们的研究结果提示TBMS I可能在神经胶质瘤治疗方面具备广阔的应用前景。

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前言

材料与方法

1. 实验材料

2.试验方法

3 统计学分析

结果

1. TBMS I抑制U251细胞增殖

2. Hoechst 33258染色法观察不同浓度TBMS I处理组中U251细胞核形态学的变化

3.不同浓度的TBMS I对U251细胞凋亡率的影响

4.TBMS I促进U251细胞内ROS的生成

5.TBMS I能够促进Cytochrome C的释放和Caspase-3的活化

6．TBMS I对凋亡通路中相关蛋白表达的影响

7.TBMS I对miR-21和PDCD4 mRNA基因水平的影响

8.TBMS I促进PDCD4蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

综述: 土贝母苷甲抗肿瘤机制的研究进展

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