Ara-C在酵母菌、白血病细胞和AML小鼠模型中的抗性研究

摘要

目的：以酵母菌、白血病细胞、非免疫缺陷AML小鼠为模型，寻找Ara-C抗性相关基因，研究Ara-C代谢通路中关键基因DCK的变化以及耐药相关的抗凋亡途径的变化。
　　方法：（1）piggyBac(PB)转座系统中的质粒构建，将 PB转座子元件中的PB转座酶序列和识别序列分别连接到两个穿梭质粒中；（2）YHL912菌株对G418的敏感性检测；（3）采用醋酸锂转化法，将构建好的PB表达质粒、供体质粒分别转入YHL912裂殖酵母中；（4）运用MTT法检测细胞对药物的敏感性；（5） AnnexinV-FITC和 PI双染法检测ABT-737对白血病细胞凋亡的影响；（6）采用AML小鼠模型，研究ABT-737与Ara-C的联合使用，对小鼠生存情况的影响。
　　结果：（1）PB转座系统能够有效地插入酵母基因组中；（2）G418对YHL912酵母菌株的最小抑制浓度为300ug/mL；（3）DCK基因在具有Ara-C抗性的AML细胞中，存在点突变、缺失突变，表达降低等现象，随着抗药程度的增加，突变比例呈升高趋势；（4）ABT-737的联合使用能够有效的改善因细胞内部抗性而导致的AML小鼠生存期缩短的现象。
　　结论：PB转座子二元转座系统能够有效地插入酵母基因组中，从而为下一步筛选耐药突变菌株，寻找耐药相关的新基因提供了基础；DCK基因在具有 Ara-C抗性的AML细胞中，存在点突变、缺失突变，表达降低等现象，这可能是导致抗药性产生的一个重要原因；抗凋亡蛋白抑制剂 ABT-737的联合使用能够有效的改善因细胞内部抗性而导致的生存期缩短的现象，说明白血病细胞具有化疗药物抗性后，仍保持对抗凋亡通路的敏感性。

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引言

材料与方法

一、材料

二、实验方法

实验结果

1.YHL912酵母菌株生长曲线及对G418的敏感性检测

2.构建重组质粒并转化YHL912酵母菌株

3.RT-PCR检测不同Ara-C抗性的AML细胞株中DCK表达情况

4.不同Ara-C抗性的AML细胞株中DCK突变情况检测

5.B117P、B117HS对抗凋亡蛋白抑制剂ABT-737的敏感性分析

讨论

参考文献

综述: Ara-C代谢相关基因对AML化疗效果的影响

攻读学位期间本人公开出版或发表的论著、论文

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致谢