新生儿缺氧缺血性脑病中的生物节律紊乱及其机制研究

摘要

新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是新生儿窒息常见的严重并发症。但是，不同程度HIE患儿存在的昼夜节律问题仍未受到重视，对其机制更知之甚少。因此，进一步研究不同程度HIE患儿的睡眠障碍问题，以及可能的参与机制，对于完善治疗方案和提高患儿的生存质量，减轻家庭负担，具有重要的临床价值和意义。miRNAs作为重要的基因表达调节子与多种疾病的发生、发展有着密切的联系，但miRNAs在HIE中的作用及其机制却尚未见报道。本研究通过对不同程度的HIE病人的睡眠状况的随访研究及对动物模型的松果体组织的系统研究，探讨筛选出的miR-182在缺氧缺血后松果体功能损伤导致的昼夜节律异常中的作用机制，以期为HIE患儿的睡眠障碍的生物治疗提供新的靶点。
　　第一部分、轻中度HIE对儿童睡眠的影响
　　目的：本部分研究旨在阐明非重度围产期缺氧缺血损伤后患儿的睡眠紊乱的特点。
　　方法：随访2010年3月至2013年8月间转院至我苏州大学附属儿童医院住
　　院，并符合入选标准的有缺氧缺血脑病史的新生儿128名，同时，以同期年龄和性别相匹配的88名正常足月新生儿作为对照，收集患者的临床资料，并进行问卷调查评估睡眠情况。用Wilcoxon符号等级检验进行比较，探索围产期不同程度HIE患儿的睡眠紊乱问题。
　　结果：通过对不同程度HIE患儿睡眠治疗的调查，发现：轻中度HIE患儿不同程度地表现出明显的睡眠的发动和维持、睡眠相关的呼吸问题以及昼夜节律问题。
　　1、与轻度HIE患儿相比，中度HIE患儿将来发生睡眠呼吸问题的风险明显增高；
　　2、轻度HIE患儿比中度HIE患儿发生昼夜节律紊乱的几率较高；
　　结论：本研究结果提示轻中度HIE患儿不同程度地表现出明显的睡眠发动和维持、睡眠相关的呼吸问题以及昼夜节律问题，由此为HIE患儿通过睡眠障碍的靶向治疗改善远期预后的设想提供了的临床依据。
　　第二部分、新生大鼠HIBD后miR-182在调节松果体CLOCK表达中的作用
　　目的：通过建立体内和体外新生大鼠缺氧缺血脑损伤（HIBD）模型，分析miR-182在松果体功能损伤导致的昼夜节律紊乱中的作用机制。
　　方法：通过高通量阵列，利用miRNAs芯片筛选差异性miRNAs，予生物信息学方法预测3’-非编码区（3’-UTR）区域含有CLOCK结合位点的差异性miRNA。荧光素酶报告基因系统等技术验证松果体中miR-182表达在CLOCK转录调控中的分子机制。
　　结果：我们证明了miR-182调控了CLOCK基因（生物钟调控过程中的核心钟基因之一）的3’-UTR；并且在通过氧葡糖剥夺环境的原代培养松果体细胞上进一步验证了miR-182对CLOCK表达的调控作用。
　　结论：miR-182在松果体组织中高表达，并且与CLOCK的表达相关。CLOCK是miR-182的目标靶基因，为缺氧缺血导致的松果体功能损害相关的节律紊乱的治疗提供了新的靶点。

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英文摘要

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第一部分 轻中度HIE对儿童睡眠的影响

前言

材料与方法

研究结果

讨论

第二部分 新生大鼠HIBD后miR-182在调节松果体CLOCK表达的作用

前言

材料及方法

研究结果

讨论

全文总结

参考文献

综述;昼夜节律与miRNA研究进展

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