抗CD146抗体在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病中的作用及机制研究

摘要

目的：探讨抗CD146抗体AA98在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病（acutegraft versus host disease，aGVHD）进程中的作用。
　　方法：将纯化的AA98抗体以及对照抗体AA1采用清除内毒素的柱子进行内毒素清除，检测清除前后内毒素水平，并对成功清除内毒素的抗体测定浓度。BALB/c(H2Kd)受体小鼠接受1050cGy全身性致死性辐照，通过尾静脉注射的方法输注1×107C57BL/6(H2Kb)小鼠来源的骨髓细胞和5×106全脾细胞，建立aGVHD模型。于异基因造血干细胞移植后第5天，流式检测小鼠脏器中CD146的表达。从移植第0天（day0）至移植后第6天（day6）每隔一天给小鼠腹腔注射AA98抗体（200μg/只），对照组注射相同剂量的IgG抗体或AA1抗体（抗CD146对照抗体）。观察小鼠生存和体重变化，记录aGVHD积分。移植后第7天采用流式细胞术检测受体小鼠的脾脏、肝脏、肺和小肠四个脏器中的免疫细胞的表型。
　　结果：有效清除了AA1和AA98抗体中的内毒素，使内毒素水平降到了10EU/ml以内，得到可用于注射aGVHD小鼠的抗体。aGVHD小鼠脏器中CD146的表达显著高于骨髓移植对照组。aGVHD生存实验表明，AA98能显著抑制异基因造血干细胞移植后aGVHD的发展，延长aGVHD小鼠的生存但不能阻止aGVHD的发生：AA98显著延长aGVHD小鼠存活时间；显著减轻aGVHD小鼠的体重下降；减轻小鼠 aGVHD临床症状，降低临床积分。流式结果显示 AA98能减少 T细胞的活化而不影响 T细胞的浸润；AA98显著下调小鼠脾脏中 CD4+T细胞和CD8+T细胞中IFN-γ和TNF-α的分泌。
　　结论：AA98能显著抑制aGVHD的发展但不能阻止其发生，其机制可能是通过抑制T细胞活化以及其细胞因子的分泌。

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前言

参考文献

材料与方法

一、实验材料

1、动物

2、主要试剂及耗材

3、主要仪器设备

二、实验方法

1、抗体浓度测定

2、内毒素清除

3、内毒素水平检测

4、制备骨髓细胞和脾细胞

5、异基因造血干细胞移植后aGVHD模型的建立

6、收集小鼠脾脏、肠系膜淋巴结、肝脏、肺和小肠，制备单细胞悬液

7、流式细胞表面染色

8、流式细胞胞内染色

9、统计学分析

实验结果

一、AA98抗体与AA1抗体的内毒素检测。

二、AA98抗体及AA1抗体浓度测定

三、AA98抗体及AA1抗体内毒素清除

四、BALB/c小鼠清髓性辐照剂量的确定。

五、aGVHD模型中T细胞与NK、DC细胞的CD146有高表达

六、AA98能抑制aGVHD但不能完全阻止aGVHD的发生。

七、AA98不影响CD4+T细胞、CD8+T细胞在aGVHD靶器官的浸润。

八、AA98抑制受体鼠肝脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化。

九、AA98不影响髓系细胞在靶器官中的浸润。

十、AA98减少受体鼠脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞IFN-γ、TNF-α的分泌。

讨论

参考文献

综述:CD146在肿瘤发展中作用的研究进展

攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文

附录

致谢