miRNA-200a靶向调控HGF/c-Met的表达对非小细胞肺癌放射敏感性的作用与机制研究

摘要

【目的】
　　探讨miRNA-200a通过抑制HGF/c-met通路在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞电离辐射作用中的生物学功能和分子机制，为NSCLC的临床放射治疗提供新的生物学标志物和分子治疗靶点。
　　【方法】
　　第一部分：1.应用免疫组织化学技术和Western Blot（蛋白质印记法）检测肺癌组织及对应正常肺组织中HGF的表达量。2.应用实时荧光定量PCR和Western Blot检测HGFsiRNA对NSCLC细胞中HGF表达水平的抑制率。3.应用Transwell试验检测低表达HGF的NSCLC细胞迁移和侵袭能力的改变。
　　第二部分：1.筛选出以HGF作为靶基因所对应的microRNA，应用实时荧光定量PCR检测所筛选出的microRNA在肺癌及正常肺组织中的表达量。2.应用实时荧光定量PCR检测转染候选microRNA模拟物后，NSCLC细胞中HGF的表达水平变化。3.应用荧光原位杂交检测肺癌及对应正常肺组织中miRNA-200a的表达量。4.应用双荧光素酶报告基因系统验证miRNA-200a对HGF的3’-UTR是否具有抑制调控作用。5.应用Western Blot检测过表达miRNA-200a的NSCLC细胞中HGF、c-met蛋白水平的表达改变。6.应用Transwell实验检测过表达miR-200a的NSCLC细胞迁移和侵袭能力的改变。
　　第三部分：1.应用流式细胞术检测分别低表达HGF和过表达miRNA-200a的NSCLC细胞的凋亡率变化。2.应用免疫荧光染色检测分别低表达HGF和过表达miRNA-200a的NSCLC细胞在电离辐射作用下DNA损伤的改变。3.应用克隆实验检测在不同电离辐射剂量点作用下分别低表达HGF和过表达miR-200a的NSCLC细胞的放射敏感性的改变。
　　【结果】
　　第一部分：1.HGF在肺癌组织及对应的正常肺组织中表达差异性明显，在肺癌组织中明显增高。2.HGF siRNA明显抑制了NSCLC细胞中HGF、c-met的表达水平。3.低表达的HGF能够降低NSCLC细胞的迁移和侵袭能力。
　　第二部分：1.以HGF作为靶基因筛选出miRNA-200a和miRNA-141，在肺癌组织中miRNA-200a下降明显。2.转染候选的microRNA模拟物后，过表达miRNA-200a的NSCLC细胞中HGF的表达水平下降明显。3.肺癌组织中的miRNA-200a表达水平相较于对应的正常肺组织下降明显。4.miRNA-200a可与靶基因HGF的3’-UTR特异性位点互补配对结合，从而发挥对HGF的抑制调控作用。5.过表达miRNA-200a后， NSCLC细胞中HGF、c-met的蛋白表达量下降。6.过表达miRNA-200a后，NSCLC细胞的迁移及侵袭能力下降。
　　第三部分：1.低表达HGF或过表达miRNA-200a的NSCLC细胞的凋亡率均显著增高。2.低表达HGF或过表达miRNA-200a的NSCLC细胞在电离辐射作用后，DNA损伤相较于正常组明显增多。3.分别在0Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy剂量的电离辐射作用下，低表达HGF或过表达miRNA-200a的NSCLC细胞克隆率明显降低，放射敏感性增高。
　　【结论】
　　在NSCLC发展过程中，抑制了miRNA-200a的表达，促使miRNA对靶基因HGF的调控抑制作用降低，靶基因HGF表达水平增高，进一步激活c-met信号通路，从而产生放射抵抗性，从而加速了NSCLC的进展。

目录

声明

前言

参考文献

第一部分 NSCLC中HGF生物学功能的研究

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 NSCLC细胞中miR-200a通过调控HGF引起的生物学功能改变

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 NSCLC细胞中调控miR-200a及HGF的表达对细胞凋亡以及放射敏感性的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述:HGF/c-met信号的调控在非小细胞肺癌放射治疗中的研究进展

缩略词表

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