DKK1在EGb-761保护氟化物所致神经损伤中的作用及机制研究

摘要

第一部分 DKK1参与氟化钠所致认知功能损伤
　　目的：评判高氟饮水地区老年人认知功能障碍的风险因素，明确DKK1是否参与氟化钠所致认知功能障碍。
　　方法：使用MoCA-B量表和AD-8量表分别对高氟饮水地区（高氟组）和正常饮水地区（正常组）老年人（60岁以上）共578例进行认知功能测试；同时采集一般信息，并抽取静脉血5ml*4，分别使用氧化应激试剂盒检测指标SOD，GSH和MDA的水平，血氟浓度测定，qRT-PCR检测DKK1的表达水平以及APOE的基因多态性。
　　结果：（1）高氟组老年患者的认知功能量表评分的异常率均高于正常组。（2）高氟组老年患者的血氟水平高于正常组，但两者都在正常血氟范围内。（3）与正常组相比，高氟组DKK1的mRNA水平明显高于正常组。（4）高氟组抗氧化指标SOD和促氧化指标MDA高于正常组。(5)氟化物所致认知功能损伤可能的风险因素是年龄、文化程度和氟斑牙。
　　结论：高氟饮水能够导致认知功能损伤。其损伤的机制可能有DKK1参与。
　　第二部分 EGb-761通过DKK1保护氟化钠对PC-12细胞的损伤
　　目的：观察氟化钠对PC-12细胞的损伤情况，并研究EGb-761在氟化钠所致细胞损伤中的作用。
　　方法：不同浓度氟化钠在不同时间点干预 PC-12细胞，用 CCK8检测细胞活性，并构建氟化钠所致神经损伤的细胞模型。Westernblot检测在 EGb-761干预氟化钠所致细胞损伤模型中经典wnt信号通路蛋白，GSK-3β、p-GSK-3β和β-catenin以及经典的 wnt信号通路抑制剂 DKK1的表达。结晶紫染色和流式细胞分析检测细胞增殖和凋亡情况。
　　结果：(1)低浓度氟化钠（<500μ M）作用24h后对PC-12细胞的活性无影响，高浓度氟化钠（1000-2000μ M）抑制 PC-12细胞的活性，EGb-761和氯化锂（LicL）能够减轻高浓度氟化钠对PC-12细胞的抑制。（2）氟化钠增加DKK1和减少β-catenin在 PC-12细胞中的表达。（3）氟化钠抑制 PC-12细胞的增殖并促进凋亡，EGb-761预处理后氟化钠抑制细胞增殖和促进凋亡的作用减轻。（4）EGb-761和LicL预处理氟化钠所致细胞损伤模型，DKK1和p-GSK-3β的表达下降，β-catenin表达增加；核内蛋白C-myc和CyclinD表达增加。
　　结论：DKK1在氟化钠抑制PC-12细胞的增殖和促进凋亡发挥重要作用。EGb-761能够通过抑制 DKK1激活 wnt信号，减轻氟化钠引起的细胞损伤，从而发挥细胞保护作用。

目录

声明

研究背景

一、氟化钠所致认知功能障碍的可能机制

二、经典wnt信号通路参与认知功能障碍的发生

三、经典wnt信号通路参与氟化钠诱导的细胞增殖和分化

四、EGb-76与认知功能

参考文献

第一部分 DKK1参与氟化物所致认知功能障碍

1. 氟化物与认知功能：

1. 流行病学调查

2. 实验试剂和仪器

3.实验方法

4.结果处理

结果

讨论

参考文献

第二部分 EGb-761通过DKK1保护氟化钠对PC-12细胞的损伤

材料和方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述:DKK1在神经精神疾病中的研究进展

攻读博士学位期间公开发表的论文、论著

中英文对照缩略词

附件1 AD8量表使用说明

致谢