17AAG-cypate聚合物胶束对人非小细胞肺癌A549细胞辐射敏感性的影响

摘要

目的:
　　研究探讨17-AAG对人非小细胞肺癌A549细胞辐射敏感性的影响和cypate对A549细胞的光热损伤作用；分析作为靶向药物纳米载体系统，17AAG-cypate聚合物胶束是否较17-AAG胶束对A549细胞具有更高的抗肿瘤活性及研究探讨此效应产生的可能机制。
　　方法:
　　有机溶剂挥发法和溶剂透析法制备包载17AAG-cypate聚合物胶束；紫外分光光度法测定17-AAG和cypate的标准曲线和浓度；透射电镜观察胶束的形态及粒径分布；纳米粒度及zeta电位分析仪测定胶束的粒径和分散度；细胞摄取实验检测纳米聚合物载体的包载对药物摄入量的影响；MTT法检测17AAG-cypate胶束对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响；克隆形成实验测定细胞存活率，用单击多靶模型分析17AAG-cypate胶束对细胞辐射敏感性的影响之间的差异；实验方法包括：β-半乳糖苷酶染色实验、细胞周期实验、细胞凋亡实验、细胞免疫荧光染色实验、western-blot实验及裸鼠移植瘤模型实验。17-AAG和cypate经PEG-PCL60包载，自组装形成17AAG-cypate聚合物胶束后增加了17-AAG和cypate的溶解度和稳定性，胶束通过胞吞作用进入细胞，之后联合X射线和近红外光照射分析药物对A549细胞生长抑制作用的分子机制。
　　结果:
　　1、用PEG-PCL60聚合物材料包载17-AAG和cypate形成17AAG-cypate胶束，在透射电镜下胶束形态周边圆整，为近似球形，平均粒径为63.42nm,多分散指数（PDI）小于0.25，粒径分布比较均匀，所有胶束粒径均在20-150nm之间；
　　2、细胞摄取实验结果显示，聚合物胶束包载相对于游离17-AAG/cypate能明显增加细胞的摄取量，孵育24h后胶束中药物的摄入量约为游离药物的4-5倍。
　　3、MTT实验表明在激光和X射线照射下17AAG-cypate胶束比17-AAG胶束对非小细胞肺癌A549细胞的毒性作用大。克隆形成实验证实17AAG-cypate胶束对A549细胞具有更明显的辐射增敏作用。
　　4、激光和X射线照射下，17AAG-cypate胶束与17-AAG胶束均可引发明显的细胞衰老现象，且17AAG-cypate胶束引发的细胞衰老比例高于17-AAG胶束。
　　5、17AAG-cypate胶束联合激光和X射线照射能引起明显的G2/M期阻滞和细胞凋亡现象，且17AAG-cypate胶束的G2/M期的阻滞程度和细胞凋亡率均高于17-AAG胶束。
　　6、17AAG-cypate胶束联合激光和X射线照射使A549细胞中的DNA损伤位点明显增多并使DNA损伤修复延迟，17AAG-cypate胶束引发的效应与17-AAG胶束组对比有明显差异。
　　7、Western-blot结果显示17AAG-cypate胶束联合激光和X射线照射使p-Erk1/2和p-Akt表达受到明显抑制，MAPK和PI3K信号通路被阻断。细胞凋亡相关蛋白PARP、caspase9、caspase3和Bcl-2的活化和表达也受到明显影响。
　　8、裸鼠移植瘤模型实验中观察到17-AAG胶束与游离17-AAG具有明显的抑制肿瘤细胞生长及转移的作用，且在X射线照射下相同浓度所起到的抑制效应呈现出了明显差异。
　　结论:
　　体外实验中，17AAG-cypate胶束对非小细胞肺癌A549细胞的增殖抑制效应明显高于17-AAG胶束，这可部分归结为17AAG-cypate胶束联合激光和X射线照射引起了更明显的细胞衰老、G2/M期阻滞、细胞凋亡和DNA损伤修复延迟现象，同时可以抑制MAPK和PI3K信号通路，影响细胞凋亡相关蛋白（PARP、caspase9、caspase3和Bcl-2）的活化和表达；在裸鼠移植瘤模型实验中，17AAG聚合物胶束与游离17-AAG对肿瘤细胞均起到了明显的抑制作用。

目录

声明

序言

参考文献

第一部分 聚合物胶束的制备及表征检测

1.1 材料、仪器及试剂配制

1.2 实验方法及步骤

1.3 结果与讨论

实验结果

讨论

参考文献

第二部分 17-AAG的放射增敏作用及cypate的光热损伤作用

2.1 材料、仪器与试剂配制

2.2 实验方法及步骤

2.3 结果与讨论

实验结果

讨论

第三部分 17AAG-cypate胶束及17-AAG胶束放射增敏机制的研究

3.1 材料、仪器与试剂配制

3.2 实验方法及步骤

3.3 结果与讨论

实验结果

讨论

参考文献

总结

综述：17-AAG胶束的肿瘤放射增敏及多药聚合物胶束的研究进展

攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文

主要中英文对照缩略表

致谢