硫化氢缓释供体GYY4137对MPTP诱导的帕金森病模型小鼠的作用及其机制

摘要

目的：研究硫化氢缓释供体GYY4137（GYY）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病（PD）模型小鼠的保护作用，并探讨相关的分子机制。
　　方法：本论文以6-8周龄的雄性、体重约23-28g的C57BL/6J小鼠为研究对象。实验动物随机分为6组，分别是对照组、MPTP诱导的PD模型组、三个不同剂量GYY+MPTP组、GYY单独组。腹腔注射MPTP（14mg/kg，每2小时注射1次，共4次）建立PD小鼠急性模型。对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。GYY+MPTP组：MPTP注射前三天开始通过腹腔注射不同剂量硫化氢（H2S）缓释供体GYY（12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg），每天一次，并在MPTP注射后持续两周。GYY单独组：与GYY+MPTP组类似平行注射50mg/kg GYY但不注射MPTP。分别以行为学包括转棒实验、网格行走测试、平衡木实验和嗑瓜子实验检测小鼠的运动协调和平衡功能；免疫组化结合DAB染色观察并计数黑质致密部多巴胺能神经元的数量；高效液相色谱（HPLC）联合电化学检测纹状体多巴胺含量；Griess法测定亚硝酸盐含量；Western blot检测纹状体多巴胺合成限速酶酪氨酸羟化酶（TH）和神经元型一氧化氮合成酶nNOS的蛋白水平,离体实验在多巴胺能神经元上使用MPP+造模，检测nNOS的蛋白水平；以特异性抗体检测硝基化修饰的α-突触核蛋白（α-syn）（第125和133酪氨酸位点）的蛋白水平。
　　结果：（1）行为学：MPTP造模后一周和两周通过转棒、平衡木和网格行走测试发现接受MPTP注射的PD模型组小鼠运动协调平衡能力显著低于对照小鼠；与模型组相比，GYY给予组（GYY+MPTP组）小鼠的运动协调能力有不同程度的改善，其中50mg/kg GYY组作用最明显，且具有统计学差异。嗑瓜子实验发现各组间均无明显差异。（2）免疫组化、Western blot和高效液相色谱分析结果显示，与对照组相比MPTP注射小鼠黑质致密部TH阳性神经元（多巴胺神经元）数量减少约40％、纹状体TH蛋白水平和多巴胺递质也明显降低；与模型组相比，GYY给予组小鼠黑质致密部TH阳性神经元数量、纹状体TH蛋白水平、以及多巴胺含量均有不同程度的增加，且具有一定的剂量依赖性，其中50mg/kg GYY组作用最明显，具有统计学差异。（3）与对照组相比，模型组小鼠纹状体中nNOS表达水平和亚硝酸盐含量明显增加；与模型组相比，GYY给予组小鼠纹状体内nNOS及亚硝酸盐含量明显降低，50mg/kg GYY作用最明显，具有统计学差异。（4）离体实验MPP+造模后，与对照组相比，模型组nNOS表达水平明显增加，与模型组相比，100μM GYY多巴胺能神经元内nNOS明显降低，且具有统计学差异。（5）与对照组相比，模型组小鼠纹状体α-syn硝化水平明显增加；与模型组相比，50mg/kg GYY给予组小鼠纹状体α-syn硝化修饰水平显著降低。（6）单独给予50mg/kg GYY组与对照组相比，上述各指标均无明显差异。
　　结论：硫化氢缓释供体GYY能够缓解MPTP诱导的小鼠运动功能障碍和黑质多巴胺神经元损伤，可能与其抑制一氧化氮过度产生及其介导的硝化应激，减轻α-syn的硝化修饰有关。

目录

声明

前言

参考文献

材料和方法

1.实验材料

1.1实验动物

1.2细胞株

1.3主要试剂

1.4主要仪器

1.5溶液配制

2.实验方法

2.1实验分组与模型制备

2.1细胞培养

2.2行为学观察

2.3免疫组织化学检测

2.4 Western-blot检测蛋白的表达

2.5 高效液相（HPLC）

2.6 Griess法测Nitrite含量

统计方法

结果

1.GYY缓解MPTP诱导的PD模型小鼠的运动功能障碍

2.GYY减少MPTP诱导的PD模型小鼠黒质纹状体区多巴胺能神经元缺失

3.GYY减轻PD模型小鼠纹状体内硝化应激水平

4.GYY抑制MPTP诱导的PD模型小鼠纹状体内α-syn硝化修饰

讨论

参考文献

结论

综述：硫化氢与帕金森病的发病机制

中英文对照缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文及科研成果

致谢