探讨PPARγ表达在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病中的作用

摘要

目的：
　　探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后急性移植物抗宿主病（aGVHD）中的作用及其初步机制。
　　方法：
　　1.选择2013年6月到2016年4月接受异基因造血干细胞移植的65例受者，收集移植后15天，30天，60天，90天以及当受者发生aGVHD时的外周血标本，同时收集10例正常人外周血标本作为正常对照，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）法定量检测PPARγ，γ干扰素（IFNγ），T-bet转录因子，白介素-4（IL-4）、GATA结合蛋白3、维甲酸核孤受体γt（RORγt）、叉头样转录因子3（Foxp3）mRNA表达水平，分析PPARγ表达水平与aGVHD，以及相关细胞因子表达的相关性。
　　2.每次实验采集两位无关健康成年人的外周血，用Ficoll密度梯度离心法分离出淋巴细胞，进行单向淋巴细胞混合实验（MLR），一组用20uL/mL丝裂霉素阻断细胞周期作为刺激细胞，另一组作为反应细胞，二者以1:1的比例进行混合培养。将PPARγ激动剂罗格列酮以100μmol/L，50μmol/L，25μmol/L，12.5μmol/L，0的浓度梯度加入混合淋巴细胞中，孵育3天后用CCK8试剂盒检测细胞增殖，细胞增殖程度用OD450表示。以上实验重复三次。用可提高PPARγ配体表氧二十碳三烯酸（EET）含量的可溶性环氧化物水解酶（sEH）抑制剂重复上述过程。
　　结果：
　　1.65例接受造血干细胞移植的受者中移植后90天内有45例发生 aGVHD（aGVHD组），20例未发生aGVHD（无aGVHD组）。
　　2.正常人外周血PPARγ表达量明显低于行造血干细胞移植后的90天内的患者（P<0.05）。在行allo-HSCT后的患者中，未发生aGVHD的患者在3个月内PPARγ表达量无明显变化；aGVHD组患者PPARγ表达量比未发生 aGVHD患者表达量低（P<0.05）。重度（Ⅲ~Ⅳ度）aGVHD患者PPARγ的表达低于轻度（Ⅰ~Ⅱ度）患者（P<0.05）。
　　3.辅助T细胞1（Th1）细胞相关因子IFNγ、T-bet表达在aGVHD组明显比无aGVHD组较高，IL-4，GATA3，RORγt，Foxp3表达无明显差别。PPARγ的表达分别与IFNγ、T-bet的表达存在负相关（P<0.05）。
　　4.PPARγ激动剂浓度为100μmol/L，50μmol/L，25μmol/L，12.5μmol/L，0时混合淋巴细胞OD值分别为0.516±0.015,0.725±0.003，1.127±0.051,1.497±0.038，1.458±0.032，提示PPARγ激动剂在25μmol/L及以上浓度时可浓度依赖性地抑制混合淋巴细胞增殖，差异有显著统计学意义(P<0.01)。
　　5.sEH抑制剂浓度为100μmol/L，50μmol/L，25μmol/L，12.5μmol/L，0时混合淋巴细胞OD值分别为0.666±0.034,0.653±0.033，0.675±0.033，0.671±0.020，0.678±0.032，对混合淋巴细胞的增殖无明显作用（P>0.05）。sEH抑制剂与 PPARγ激动剂未发现协同作用。
　　结论：
　　PPARγ低表达与aGVHD的发生及严重程度密切相关，且与Th1细胞因子的表达均呈负相关。PPARγ表达的增加可以抑制淋巴细胞增殖，可能是抑制aGVHD的机制之一。

目录

声明

引言

材料和方法

1. 研究对象

2. aGVHD预防、诊断和治疗

3.主要试剂与仪器

4. 研究方法

结果

1. PPARγ表达与aGVHD的相关性

2.PPARγ表达与介导aGVHD发生的炎症因子的相关性

3. PPARγ激动剂罗格列酮对淋巴细胞增殖的影响

4. PPARγ配体EET相关水解酶sEH抑制剂对淋巴细胞增殖的影响

5. sEH抑制剂与罗格列酮联合作用的探究

讨论

参考文献

综述：PPARγ在免疫细胞中的功能及移植中的应用

英文缩略词表

攻读学位期间公开发表的文章

致谢