斑蝥素和去甲斑蝥素通过抑制胰腺癌肿瘤干细胞增强药物敏感性的机制研究

摘要

目的：
　　肿瘤干细胞参与肿瘤的生长转移，并与耐药有关。有研究证实，CD24、CD44和EPCAM可作为胰腺癌肿瘤干细胞的标记物。β-catenin信号通路的异常活化有助于肿瘤干细胞干性的维持。斑蝥素是中国传统药物斑蝥的活性成分，研究证实其作用靶点是细胞内蛋白磷酸酶2A（protein phophatase2APP2A）。我们在前期研究中发现，斑蝥素能够诱导β-catenin磷酸化，从而抑制该信号通路活性。本研究拟探讨斑蝥素及其衍生物去甲斑蝥素是否可以通过抑制β-catenin信号通路从而抑制胰腺癌细胞干性，为将斑蝥素进一步应用于胰腺癌的治疗提供理论基础。
　　方法：
　　1.应用MTT法检测胰腺癌细胞的增殖能力。
　　2.应用平板克隆法检测胰腺癌细胞克隆形成能力。
　　3.应用基因芯片检测肿瘤干细胞干性相关基因的mRNA表达变化。
　　4.应用流式细胞术检测CD24、CD44和EPCAM在胰腺癌细胞中的蛋白表达水平。
　　5.应用流式细胞术检测CD44+/CD24+/EPCAM+细胞群在胰腺癌细胞中的比例。
　　6.应用Real-time PCR检测CD24、CD44和EPCAM在胰腺癌细胞中的mRNA表达水平。
　　结果：
　　1.斑蝥素和去甲斑蝥素可以抑制胰腺癌细胞的生长。
　　2.斑蝥素和去甲斑蝥素可以抑制胰腺癌细胞克隆形成能力。
　　3.斑蝥素和去甲斑蝥素在mRNA水平上抑制CD24、CD44和EPCAM的表达。
　　4.斑蝥素和去甲斑蝥素在蛋白质水平上抑制CD24、CD44和EPCAM的表达。
　　5.斑蝥素和去甲斑蝥素可以减少CD44+/CD24+/EPCAM+细胞群在胰腺癌细胞中的比例。
　　6.斑蝥素和去甲斑蝥素通过β-catenin通路依赖性机制抑制CD24、CD44和EPCAM表达。
　　7.斑蝥素和去甲斑蝥素可以增强吉西他滨和厄洛替尼对胰腺癌的细胞毒性。
　　结论：
　　PP2A抑制剂（斑蝥素、去甲斑蝥素）可以通过β-catenin通路抑制胰腺癌细胞干性，同时斑蝥素和去甲斑蝥素可以增加吉西他滨和厄洛替尼的细胞毒性，这为胰腺癌的治疗提供了一种新的治疗策略。

目录

声明

引言

材料

一、实验材料和仪器设备

二、试剂

方法

一、细胞培养

二、 MTT 比色法检测细胞活力

三、平板克隆

四、基因芯片

五、蛋白表达评估

六、胰腺癌细胞干性评估

七、Real-time PCR

八、统计学处理

结果

一、 斑蝥素和去甲斑蝥素对胰腺癌细胞生长的影响

二、 斑蝥素和去甲斑蝥素对胰腺癌细胞克隆形成能力的影响

三、 斑蝥素和去甲斑蝥素对胰腺癌干细胞表面标记物mRMA表达的影响

四、 斑蝥素和去甲斑蝥素对CD24、CD44和EPCAM蛋白表达水平的影响

五、 斑蝥素和去甲斑蝥素对胰腺癌细胞中 CD44+/CD24+/EPCAM+细胞亚群比例的影响

六、 斑蝥素和去甲斑蝥素通过β-catenin通路对CD24、CD44和EPCAM

七、 斑蝥素和去甲斑蝥素对加强吉西他滨和厄洛替尼对胰腺癌细胞毒性的影响

讨论

结论

参考文献

综述:胰腺癌干细胞

中英文对照缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢