通过中途进退式聚合酶链反应检测胶质瘤中的人类巨细胞病毒

摘要

目的：
　　验证中途进退式聚合酶链反应（drop in/out PCR）对于检测肿瘤样品中的人类巨细胞病毒（HCMV）的灵敏性和准确性，并通过对50例人颅内肿瘤标本中的HCMV检测，分析HCMV感染与肿瘤分型，WHO分级，以及与细胞受体PDGFRα和EGFR的关系。
　　方法：
　　应用基因克隆技术，构建HCMV克隆质粒，并进行梯度稀释，用drop in/out PCR检测不同梯度的HCMV质粒，确定可检测到的最低质粒浓度，分析此方法对于检测该病毒核酸的灵敏性。然后，用drop in/out PCR检测50例颅内肿瘤样品中的HCMV，并用免疫组化技术对有效结果的样品检测HCMV IE抗原来验证drop in/out PCR的准确性。结合病理资料分析HCMV感染与肿瘤分型以及WHO分级的关系。最后，用免疫组化技术检测所有有效结果样品的PDGFRα和EGFR抗原，并结合之前HCMV IE和drop in/out PCR检测结果分析HCMV感染与细胞受体PDGFR和EGFR的关系。
　　结果：
　　我们发现，对不同梯度浓度的HCMV质粒进行drop in/out PCR检测后，可检测到的最低质粒浓度为5*104个质粒分子/ml，验证了此方法灵敏度较好。在对50样品的检测中，得到有效结果41例，其中HCMV阳性29例，统计分析证明其阳性率与41例样品的HCMV IE免疫组化结果无明显差别（p>0.05），并且两者结果一致性可（p<0.05），进一步证实drop in/out PCR对于检测肿瘤样品中的HCMV准确性尚可。我们还发现，HCMV感染与否和其感染强度与胶质瘤类型以及胶质瘤 WHO分级无明显相关性（p>0.05），HCMV感染与否与两种细胞受体是否表达无明显相关性（p>0.05），HCMV感染强度与EGFR表达量之间存在正相关关系（p<0.05），而与PDGFRα无明显正相关关系（p>0.05）。
　　结论：
　　1.drop in\out PCR可以用于检测胶质瘤样品中的HCMV，并且其灵敏性与准确性均较好。
　　2.HCMV是否感染、感染强度均与胶质瘤病理类型以及WHO分型无明显相关性。
　　3.HCMV是否感染与PDGFRα和EGFR是否表达相关性不显著，HCMV感染强度与EGFR表达量显著正相关，而与PDGFRα表达量无明显正相关关系。

目录

声明

前言

材料和方法

1.材料

2.方法

结果

1.验证drop in/out PCR对于检测HMCV核酸的灵敏性

2.drop in/out PCR检测肿瘤样品中的HCMV

3.免疫组化检测检测肿瘤组织中的HCMV

4.HCMV感染与胶质瘤病理类型及WHO分级的关系

5.HCMV感染与细胞受体PDGFRα和EGFR的关系

讨论

结论

参考文献

综述:人类巨细胞病毒感染与神经胶质瘤的关系研究进展

攻读硕士期间公开发表的论文

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致谢