吗啡-6-葡萄糖醛酸注射液的药代动力学研究

摘要

目的：本文建立高效液相色谱–串联质谱(HPLC–MS/MS)法测定生物样品中吗啡-6-葡萄糖醛酸(morphine-6-glucuronic acid，M6G)的药物浓度，旨在研究M6G注射液在体内的吸收、分布、代谢和排泄，为其进一步研究与开发提供科学依据。
　　方法：(1)大鼠血浆样品中的待测物M6G和内标YN-7507经固相萃取板萃取处理后，采用Atlantis dC18(2.1×150 mm，5μm)色谱柱分离，通过电喷雾电离源(electrospray lonization，ESI)以多反应监测(multiple reaction monitoring，MRM)方式进行正离子检测。用于定量分析的离子对分别为 m/z：462.2→286.1(M6G)和478.11→268.2(YN-7507)。(2)选用Sprague-Dawley大鼠24只，雌雄各半，分为3个剂量组，每组4只动物/性别，各组给药剂量分别为2、4、6 mg/kg（以M6G二水物计），给药容量均为4 mL/kg，10-20 s完成给药。动物于药前，给药结束后2 min、5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h的时间点采集血样。实验采用HPLC-MS/MS方法分析大鼠血浆中M6G的浓度，方法的定量下限为5 ng/mL。用代谢动力学数据分析软件WinNonlin6.2的非房室模型法(non-compartment model，NCA)对血浆浓度数据进行分析，计算药代参数，考察给药后 M6G在动物体内的代谢特征。(3)选用Sprague-Dawley大鼠30只，雌雄各半，按性别区段随机分为5组，另设空白组5只/性别。动物按照4 mg/kg的剂量静脉注射给予M6G注射液，其中分布组动物分别在给药后0.5 h、2 h和4 h安乐死，每个时间点3只/性别，采集血浆、脑、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、体脂、肌肉、生殖腺（雄性：睾丸；雌性：卵巢）；胆汁组及部分空白组替换动物分别在给药后0.5 h、2 h、4 h、8 h收集胆汁；粪尿组动物分别在给药后4 h、8 h、24 h、48 h、72 h收集尿液和粪便，每个时间段3只/性别。采用HPLC-MS/MS方法检测血浆样品中M6G的浓度，同时参考该方法对各组织、胆汁及粪尿中M6G的检测方法进行部分验证，并对上述生物基质中M6G的浓度进行测定。
　　结果：(1)本方法M6G的线性范围为5-1000 ng/mL，标准曲线样品各点的准确度在92.36％-104.18%之间，其线性系数均大于0.99。质控样品(15、120、800 ng/mL)的平均准确度在98.76%-103.40%之间，除超限样品外，其余质控样品的准确度在87.32%-111.60%之间。质控样品的批内精密度在3.90%-9.63%之间，批间精密度在4.04%-8.79%之间。M6G分析方法的定量下限为5 ng/mL。定量下限样品的平均准确度在101.50%-109.60%之间，除超限样品外，其余定量下限样品的准确度在87.00%-119.40%之间。定量下限样品的批内精密度在8.33%-11.15%之间，批间精密度为10.09%。M6G的低、中、高浓度样品的提取回收率在87.51%-118.27%之间，其CV（变异系数）值在6.98%-8.35%之间，基质效应在88.96%-115.82%之间，其 CV值在4.91%-9.54%之间。M6G的稀释回收率(100倍)在101.08%-108.09%之间，CV是2.35%。(2)按照2、4、6 mg/kg（以M6G二水物计）的给药剂量，单次静脉推注给予大鼠浓度分别为0.5、1、1.5 mg/mL的M6G注射液后，M6G的t1/2分别为0.41、0.40、0.39 h，Cmax分别为7417.16、15496.22、21920.37 ng/mL，AUC(0-8h)分别为2020.0、3832.8、5513.9 h·ng/mL，AUCinf分别为2022.7、3839.1、5523.4 h·ng/mL，Vd分别为573.87、612.39、608.56 mL/kg，Cl分别为999.78、1069.31、1112.92 mL/h/kg，MRT分别为0.26、0.26、0.25 h。M6G注射液以2、4、6 mg/kg（以M6G二水物计）的剂量静脉推注给药，雌性与雄性M6G的平均Cmax比率分别为1.03、0.97、1.16，平均AUC(0-8h)的比率分别为0.95、0.81、1.04。M6G注射液在2-6 mg/kg（以M6G二水物计）的剂量范围内静脉推注给药，动物血浆中 M6G的峰浓度及 AUC随剂量增加而增大。3个剂量组的剂量比率为1：2：3，雄性动物M6G的平均Cmax比率为1：2.15：2.77，平均AUC(0-8h)比率为1：2.05：2.62；雌性动物M6G的平均Cmax比率为1：2.03：3.13，平均AUC(0-8h)比率为1：1.74：2.85；动物总体M6G的平均Cmax比率为1：2.09：2.96，平均AUC(0-8h)比率为1：1.90：2.73。(3)动物按照4 mg/kg的剂量静脉注射给予M6G注射液后0.5 h，M6G在各组织中均有分布，在小肠中相对浓度最高，其次为肾、胃和肝，在脑中的浓度相对最低，各组织脏器中M6G浓度依次为小肠>肾>胃>肝>肺>生殖腺>肌肉>体脂>脾>心>脑；给药后2 h，M6G在血浆和各组织中的浓度迅速下降，但在脑组织中浓度下降较慢，相对于给药后0.5 h，M6G消除不到一半；给药后4 h，除胃、小肠外，其他组织和血浆中M6G浓度均接近或低于定量下限。给药后8 h胆汁中M6G原型的平均累积排泄率为27.70%，剔除死亡动物，给药后8 h M6G原型累积排泄率为42.77%。给药后72 h尿中M6G原型的平均累积排泄率为23.90%，粪中为0.04%。检测大鼠各组织、胆汁、尿液和粪便中M6G的HPLC-MS/MS方法的部分验证结果显示，该方法满足生物分析的要求，适用于本实验中各生物基质样品中M6G的测定。
　　结论：建立了HPLC–MS/MS法测定生物样品中M6G的含量，该方法灵敏、简便、重现性好，适用于生物样品中M6G浓度检测及药代动力学研究。大鼠在静脉注射给予M6G注射液后，M6G分布广泛，各组织中均可检测到M6G，其中在小肠、肾、胃和肝中浓度相对较高，在脑中的浓度相对较低，M6G在各组织中的浓度消除较快，且随血药浓度下降而下降，但在脑组织中下降较少，给药后0.5-4 h脑组织中M6G的消除相对较慢。很少量的M6G原型经粪便排泄，部分M6G原型经胆汁及尿排泄。

目录

声明

前言

一、本课题研究的理论基础及国内外研究现状

二、本课题的研究内容

三、本课题的创新点

四、本课题的研究意义及价值

第一部分 HPLC-MS/MS法定量测定Sprague-Dawley大鼠血浆中M6G的方法建立

仪器与试剂

方法

结果

小结

第二部分 M6G在大鼠体内的药代动力学参数研究

仪器与材料

动物的给药方案

结果

小结

第三部分 M6G在大鼠体内的组织分布及排泄研究

仪器与材料

动物的给药方案

结果

小结

讨论

结论

参考文献

综述：吗啡的药代动力学研究概述

英文缩写词表

攻读学位期间发表的论文

致谢