二至丸、地黄煎对小鼠免疫生殖内分泌系统影响的比较研究

摘要

1、研究目的
　　 用环磷酰胺制备小鼠免疫低下与内分泌紊乱模型，分别给小鼠灌服二至丸、地黄煎的水煎剂，结合其相关免疫指标和生殖内分泌指标，经统计分析，揭示与比较二至丸、地黄煎对小鼠免疫和生殖内分泌系统的调节作用及调节机制。
　　 2、研究方法
　　 采用KM雌性小白鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、香菇多糖组、二至丸合地黄煎组、二至丸组和地黄煎组。除了正常对照组外，其余各组均给小鼠ip环磷酰胺建立免疫低下模型，各组分别按设计剂量连续ig给药1周。每日观察并记录小鼠生活状态，给药结束后处死小鼠分离脏器血清，进行以下指标的观察与检测：①检测小鼠胸腺指数、脾指数、卵巢指数及子宫指数；②通过HE染色观察胸腺及卵巢的形态学改变；③通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-1a水平，用放射免疫法(RIA)检测血清中雌二醇(E2)的水平；④通过免疫组化法测脾脏、胸腺中雌二醇受体(ER)表达，测卵巢、子宫白介素1受体(IL-1R)表达；⑤用流式细胞术(FCM)检测小鼠脾细胞的细胞周期及脾细胞的凋亡率。
　　 3、研究结果
　　 3.1、二至丸、地黄煎对小鼠一般生活状态、免疫器官及生殖内分泌器官的影响
　　 3.1.1、小鼠的一般生活状态观察与正常对照组小鼠比较，其余各组小鼠均于注射环磷酰胺后第1天开始出现精神萎靡、反应迟钝、体毛稀少、体重下降等表现。但各治疗组小鼠与模型组小鼠比较，状态有所改善。
　　 3.1.2、免疫器官脏器指数及形态学观察与正常对照组比较，环磷酰胺可使小鼠的胸腺指数和脾指数下降，而各用药组均对此具有升高作用，其中，对于脾指数的升高作用明显，具有统计学意义(P＜0.01～0.05)；二至丸单用对于胸腺指数的升高作用较好，具有统计学意义(P＜0.05)。与正常对照组比较，环磷酰胺能使小鼠胸腺体积变得狭长细小，髓质明显萎缩，皮质层相对较厚，生发中心明显减少，而各用药组对其均有不同程度的改善作用。
　　 3.1.3、生殖内分泌器官脏器指数及形态学观察与正常对照组比较，环磷酰胺可使小鼠的卵巢指数和子宫指数下降，而各用药组均对此具有升高作用，其中，对于子宫指数的升高作用明显，具有统计学意义(P＜0.01)。二至丸、地黄煎单用或两者合用对于子宫指数的升高效果一致，三者之间差异不具有统计学意义。香菇多糖组、二至丸合地黄煎组及地黄煎组对于卵巢指数的升高作用较好，具有统计学意义(P＜0.01～0.05)，其中香菇多糖组及地黄煎组效果尤为突出，二至丸单用对于卵巢指数的升高作用不明显，不具有统计学意义。与正常对照组比较，模型组小鼠卵泡形状不规则，原始卵泡减少，生长卵泡增多，各用药组对此均有不同程度的改善作用。
　　 3.2、二至丸、地黄煎对小鼠血清IL-1a、卵巢和子宫IL-1R水平表达的影响
　　 3.2.1、与正常对照组比较，环磷酰胺可使小鼠血清中IL-1a的含量下降，而各用药组均对此具有升高作用，其中，二至丸合地黄煎组及二至丸组对于IL-1a的升高作用明显，具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3.2.2、免疫组化显示IL-1R在卵巢中的水平明显高于在子宫中的水平。正常对照组卵巢中IL-1R分布均匀，范围广泛；模型组卵巢中IL-1R分布较乱，范围缩小：各用药组卵巢中IL-1R分布较均匀，范围较广，与模型组比较，有所改善。正常对照组子宫中IL-IR分布较少，模型组可见少量分布，各用药组可见少量分布，正常对照组、模型组及各用药组之间无明显差异。
　　 3.3、二至丸、地黄煎对小鼠血清E2、胸腺和脾脏ER水平表达的影响
　　 3.3.1、与正常对照组比较，环磷酰胺可使小鼠血清中E2的含量下降，而各用药组均对此具有升高作用，其中，二至丸合地黄煎组及阳性药物香菇多糖组对于E2的升高作用明显，具有统计学意义(P＜0.01～0.05)。
　　 3.3.2、免疫组化显示胸腺与脾脏中ER的分布差异不大。正常对照组胸腺中ER分布均匀广泛，染色呈强阳性；模型组胸腺中ER分布杂乱不均，染色呈弱阳性；用药组中香菇多糖组、二至丸合地黄煎组、二至丸组胸腺中ER的分布较均匀，范围较广，与模型组比较，有一定改善。正常对照组脾脏中ER分布均匀广泛，染色呈强阳性；模型组脾脏中ER分布不均匀，且范围较小，染色呈弱阳性；各用药组脾脏中ER的分布较均匀，范围较广，与模型组比较，有一定的改善。
　　 3.4、二至丸、地黄煎对小鼠脾细胞周期及细胞凋亡的影响
　　 3.4.1、脾细胞的细胞周期环磷酰胺能明显抑制脾细胞增殖，各用药组均能拮抗环磷酰胺引起的脾细胞增殖抑制，表现为G0+G1期较环磷酰胺模型组减少，S期明显增加，G2+M期减少，其中二至丸组及地黄煎组G2+M期减少较明显，具有统计学意义。二至丸、地黄煎单用与合用效果比较显示，两药合用S期增加更明显，G0+G1期减少更明显，差异具有统计学意义。
　　 3.4.2、脾细胞的细胞凋亡率环磷酰胺能明显诱导小鼠脾细胞凋亡，经用药后，除了香菇多糖组外，其余各用药组均能明显拮抗环磷酰胺引起的脾细胞凋亡，具有统计学意义(P＜0.01)。二至丸、地黄煎单用与合用效果比较，差异无统计学意义。
　　 4、结论
　　 ①二至丸、地黄煎单用或者两者合用对于免疫低下小鼠的一般生活状态、免疫器官的脏器指数（胸腺指数、脾指数）及生殖内分泌器官的脏器指数（卵巢指数、子宫指数）均有一定的改善作用，单用与合用的效果差异不大，与阳性药物香菇多糖的效果基本一致。胸腺、卵巢HE染色的结果与上述脏器指数的结果基本一致。
　　 ②二至丸、地黄煎单用或者两者合用对于免疫低下小鼠血清中免疫细胞因子IL-1a的水平均有一定的改善作用，合用比单用及阳性药物香菇多糖的效果好；对于生殖内分泌器官（卵巢）中的白介素1受体(IL-1R)的含量均有不同程度的改善作用，单用与合用的效果差异不明显。
　　 ③二至丸、地黄煎单用与合用对于免疫低下小鼠血清中雌激素E2的水平均有一定的改善作用，合用比单用的效果好，阳性药物香菇多糖对于E2水平的改善作用更好；对于免疫器官（胸腺、脾脏）中的雌二醇受体(ER)含量均有不同程度的改善作用，单用与合用的效果差异不明显。
　　 ④二至丸、地黄煎单用与合用对于免疫低下小鼠脾细胞的细胞周期S期（DNA合成期）具有显著的提高作用，合用比单用的效果好，均比阳性药物香菇多糖的效果好。二至丸、地黄煎能明显拮抗环磷酰胺引起的脾细胞凋亡，单用与合用的效果差异不明显，均比阳性药物香菇多糖的效果好。
　　 ⑤环磷酰胺作为传统免疫低下造模药，在打击免疫器官的同时，对于生殖内分泌器官的打击同样存在，也就是说它既能造成免疫低下，也能造成生殖内分泌系统的紊乱。
　　 ⑥二至丸、地黄煎对于实验性免疫低下小鼠的免疫指标、生殖内分泌指标均有一定的改善作用，在提高免疫功能的同时，对其生殖内分泌系统的功能也有一定的增强作用；也就是说免疫功能的提高有助于生殖内分泌系统恢复平衡，而生殖内分泌系统的平衡对于免疫功能的恢复也具有一定的作用。二至丸、地黄煎对于免疫生殖内分泌系统具有一定的网络调节作用。
　　 ⑦单用二至丸对于胸腺指数的改善效果较好；单用地黄煎对于卵巢指数的改善效果较好；对于血清中IL-1a、E2水平及脾细胞周期S期的改善方面，两者合用的效果比单用的效果好。综合考虑，对于免疫生殖内分泌系统的调节，二至丸、地黄煎两者合用比单用更具优势。
　　 5、创新之处
　　 ①现国内外有关二至丸的实验研究主要集中在对免疫方面的研究，对生殖内分泌系统影响机制的研究较少，关于地黄煎的研究，至今还没有发现，这也是本研究的创新之一
　　 ②本研究的创新之处还在于，将生殖内分泌与免疫两大系统相结合，证实二至丸、地黄煎在增强免疫功能的同时，也能调节其生殖内分泌系统中相关激素的水平，而生殖内分泌系统的恢复对于免疫功能同样具有增强作用，最终达到免疫生殖内分泌系统相平衡的状态，并将二至丸、地黄煎单用与合用做一比较，为二至丸、地黄煎在临床上更为广泛的应用提供理论依据和实验基础。

目录

声明

摘要

第一章 引言

1.研究目的、立项依据及国内外的研究动态和发展趋势

2.课题研究的内容和主要研究方法

参考文献

第二章 文献综述

1.部分补益药主要化学成分分析

2.补益药对免疫系统的干预作用

3.补益药对生殖内分泌系统的影响

4.结语

参考文献

第三章 实验研究

实验一 二至丸、地黄煎对小鼠生活状态及免疫生殖内分泌器官的影响

实验二 二至丸、地黄煎对小鼠IL-la、IL-IR水平的影响

实验三 二至丸、地黄煎对小鼠E2、ER水平的影响

实验四 二至丸、地黄煎对小鼠脾细胞周期及细胞凋亡的影响

参考文献

研究小结

硕士在读期间发表论文

致谢