延胡索醇提物和延胡索生物碱体内抗血管生成及其对VEGF调控作用的实验研究

摘要

[目的]：
　　 探讨延胡索醇提物及延胡索生物碱体内抗血管生成的作用及对VEGF的调控作用。
　　 [方法]:
　　 1．利用MTT法，检测延胡索醇提物及延胡索生物碱对人胃癌细胞株BGC-823、人肺腺癌细胞株A549、人结肠癌细胞株LOVO以及人肝癌细胞株HepG-2的增殖抑制作用，筛选最敏感肿瘤细胞株；
　　 2．以最敏感肿瘤细胞株为对照，利用MTT法测定延胡索醇提物及延胡索生物碱对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的增殖抑制作用；
　　 3．通过建立鸡胚尿囊膜(CAM)模型，观察延胡索醇提物及延胡索生物碱在体内对新生血管的抑制作用；
　　 4．采用WesternBlot法观察并比较延胡索醇提物及延胡索生物碱对A549细胞、HUVEC细胞VEGF表达的影响；并观察延胡索生物碱对AKT，MAPK,NF-κB信号通路的影响。
　　 [结果]:
　　 1．延胡索醇提物及延胡索生物碱在12.5μg/ml～200μg/ml浓度范围内对HepG2、A549、LOVO以及BGC-823细胞均有一定的增殖抑制作用。延胡索醇提物作用于以上四种肿瘤细胞后IC50分别为：167.845μg/ml，153.078μg/ml，158.894μg/ml，155.865μg/ml;而延胡索生物碱作用四种细胞后的IC50分别为：89.971μg/ml,45.672μg/ml，109.187μg/ml以及62.62μg/ml。即延胡索醇提物及延胡索生物碱对人肺腺癌A549细胞最为敏感。
　　 2．延胡索醇提物在3.125μg/ml～25μg/ml浓度范围对A549细胞的增殖抑制率为6.77％～23.94%之间，同样条件下作用于HUVEC48h后，抑制率在16.94%～42.6%之间；延胡索生物碱在3.125μg/ml～25μg/ml浓度范围内作用于A549细胞48h后的增殖抑制率在10.22%～36.15%之间，相同浓度范围的延胡索生物碱作用HUVEC48h后，抑制率在19.03%～49.94%之间。即延胡索醇提物和延胡索生物碱在相同浓度下，对HUVEC细胞的增殖抑制作用要优于对A549的增殖作用，P值均＜0.05，具有统计学意义，故而认为延胡索醇提物和延胡索生物碱对A549细胞和HUVEC细胞体外增殖存在差异细胞毒作用。
　　 3．延胡索醇提物3.125μg/ml～25μg/ml浓度范围内对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制率在8.68%～25.2%之间，延胡索生物碱在3.125μg/ml～25μg/ml浓度范围内对鸡胚尿囊膜的新生血管的抑制率在19.32%～50.2%之间。故而，认为延胡索生物碱在体内具有较好的抗血管生成的作用，而在相同条件下，延胡索醇提物对鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管抑制作用相对较弱。
　　 4．延胡索生物碱可下调A549细胞VEGF的蛋白表达水平，在50μg/ml时即可降低VEGF的表达水平。而在相同条件下，延胡索醇提物对VEGF蛋白表达并无明显影响。延胡索生物碱在12.5μg/ml～200μg/ml浓度范围对A549细胞中NF-κB信号通路上的p65，p50，IκB-a的蛋白水平以及IκB-a的磷酸化水平均无明显的影响；而在200μg/ml时可降低Akt蛋白磷酸化水平，其磷酸化的水平与对照组相比可以较明显的降低；对MAPK3s途径中Erk、P38、JNK信号通路上的Erk、P38、JNK的蛋白及其磷酸化水平并无明显影响。
　　 在亚细胞毒作用浓度范围3.125μg/ml～25μg/ml的延胡索醇提物对HUVEC细胞VEGF表达无明显影响，而在同样的条件下，延胡索生物碱可显著抑制其VEGF的表达水平，在12.5μg/ml时即可降低其表达，并呈现出剂量依赖性。
　　 [结论]：
　　 延胡索生物碱在体外对HepG2细胞、A549细胞、LOVO细胞、BGC-823细胞均具有较强的增殖抑制作用，而延胡索醇提物体外对四种肿瘤细胞的增殖抑制作用相对较弱；延胡索醇提物及延胡索生物碱体内均具有一定的抗血管生成作用；延胡索生物碱可降低A549细胞和HUVEC细胞中VEGF的表达；延胡索生物碱可能是通过Akt途径对A549细胞VEGF表达产生影响。